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产品名称:游离胆固醇(FC)检测试剂盒

产品规格:50管/48样,100管/96样

产品货号:YX-C-B410,YX-W-B410

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

YX-C-B410

游离胆固醇(FC)检测试剂盒

可见分光光度法

50/48

180

YX-W-B410

游离胆固醇(FC)检测试剂盒

微量法

100/96

350

游离胆固醇(FC)含量检测试剂盒说明书(微量法
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
产品内容:

试剂一:异丙醇100mL(自备); 
工作液:液体30mL×1 瓶,4℃保存;
标准品:粉剂×1支,10mg 胆固醇,4℃保存。临用前加入517μL提取液,振荡溶解,即为50μmol/mL 的胆固醇标准溶液。

产品说明:
FC是构成细胞膜的主要成分,也是合成肾上腺皮质激素、性激素、胆汁酸及维生素D等生理活性物质的重要原料。FC浓度可作为脂代谢的指标。 测定原理: FC氧化酶催化FC生成△4-胆甾烯酮和H2O2,过氧化物酶催化H2O2、4-氨基安替比林和酚生成红色醌类化合物,在500nm有吸收峰, 其颜色深浅与FC含量成正比。
自备仪器和物品:

水浴锅、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、和蒸馏水。

一、FC的提取:
1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL
试剂一)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心10min,取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声2秒,间隔3秒,总时间3min); 然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。
3. 血清(浆)样品:直接测定。
二、测定步骤:
1、 分光光度计/酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 500nm,蒸馏水调零。
2、 将 50μmol/mL 标准液用提取液稀释为 2.5、1.25、0.625、0.3125、0.15625、0.078μmol/mL 的标准溶液备用。
3、 操作表:(在离心管或 96 孔板中依次加入下列试剂)
 

测定管

标准管

空白管

样品(µL

20

-

-

标准溶液(μL

-

20

-

提取液(μL

-

-

20

工作液(µL

180

180

180

充分混匀,37℃静置 15min,反应完成后测定 500nm 处吸光值 A,分别记为 A 测定管、A 标准管和 A 空白管,A=A 测定管-A 空白管,A 标准=A 标准管-A 空白管, 空白管只需测一次。


总胆固醇含量计算
一、标准曲线的绘制:
以各个标准溶液的浓度为 x 轴,其对应的△A 标准为 y 轴,绘制标准曲线,得到标准方程 y=kx+b, 将△A 带入方程得到 x(μmol/mL)
二、总胆固醇含量的计算:
1. 血清(浆)中 FC 含量计算: FC 含量(μmol/dL)=x×100。
2. 组织中 FC 含量计算:
1. 按样本蛋白浓度计算
FC 含量(μmol/mg prot)=x×V 提取÷(Cpr×V 提取)=x÷Cpr。
2. 按样本鲜重计算
FC 含量(μmol/g 鲜重)=x×V 提取÷W= x÷W
3. 细胞、细菌中 FC 含量计算:
FC 含量(μmol/104 cell)=x×V 提取÷500=0.002x。
100:1dL=100mL;V 提取:加入样本的提取液体积,1mL;W:样本质量,g;500:500 万个细胞数量。
注意事项
当△A 大于 1.5 时,建议将样本用提取液稀释后再进行测定。

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