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产品名称:游离脂肪酸(FFA)检测试剂盒

产品规格:50管/48样,100管/96样

产品货号:YX-C-B400,YX-W-B400

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

YX-C-B400

游离脂肪酸(FFA)测试盒(含量)

可见分光光度法

50/48

310

YX-W-B400

游离脂肪酸(FFA)测试盒(含量)

微量法

100管/96

600

游离脂肪酸(FFA)测试盒说明书微量法

注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

货号:YX-W-B400

规格:100T/96S

产品内容:

提取液:液体100mL×1瓶,室温保存。

试剂一:自备。实验前一天,取一个玻璃瓶,按照正庚烷:无水甲醇:氯仿=24:1:25的比例配置(自备),盖紧后混匀,室温保存。

试剂二:液体6mL×1瓶,室温保存。

试剂三:粉剂×2瓶,4℃保存。临用前在试剂瓶中加入13mL无水乙醇,充分溶解,4℃可保存一周。标准品:粉剂×1瓶,10mg棕榈酸,室温保存。临用前把试剂转移到10mL玻璃瓶中,加入7.8mL氯仿充分溶解,即为5μmol/mL的棕榈酸标准溶液。

产品说明:

FFA既是脂肪水解的产物,又是脂肪合成的底物。血清中FFA的浓度与脂类代谢、糖代谢、内分泌功能有关。

FFA与铜离子结合形成脂肪酸铜盐,并溶于氯仿;利用铜试剂法测定铜离子含量,即可推算出游离脂肪酸含量。

自备仪器和用品:

研钵、冰、台式离心机、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、一个25mL玻璃瓶、一个15mL玻璃瓶、正庚烷、无水甲醇、氯仿(三氯甲烷)、无水乙醇和蒸馏水。

操作步骤:

一、样品中FFA提取:

1、血清中FFA测定:将所取血液,室温静置1h后,于4℃离心机3500rpm离心15min,取上层血清置于-20℃冰箱保存,待测

2、组织中FFA含量测定:组织用生理盐水冲洗干净后,用吸水纸吸取表面水分,称取约0.1g,加入1mL提取液,匀浆后,8000rpm,4℃离心10min,取上清液,置冰上待测。

二、测定:

a. 分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长到550nm,蒸馏水调零。

b. 试剂二在37℃水浴中预热30min以上。

c. 标准品的稀释:将标准品稀释成1、0.8、0.6、0.4、0.2、0.1、0.05μmol/mL。

d. 按下表在1.5ml离心管中加入相应试剂


对照管

测定管

空白管

标准管

蒸馏水(μL

10

 

 

 

样本(μL

 

10

 

 

氯仿(μL

 

 

10

 

标准品(μL

 

 

 

10

试剂一(μL

100

试剂二(μL

40

充分振荡10min后,3000rpm,离心10min

上层溶液μL

50

试剂三(μL

200

充分振荡2min后,静置15min,取0.2mL于微量比色皿/96孔板,在550nm下测吸光值,分别记为A对照管、A测定管、A空白管、A标准管。对照管和空白管各只做一管)

三、FFA含量计算:

(1) 标准曲线的绘制:

以标准溶液的浓度为x轴,以ΔA标准(ΔA=A标准管-A空白管)为y轴,绘制标准曲线,得到方程y=kx+b。将ΔA(ΔA=A测定管-A对照管)带入方程得到x。

(2) 血清FFA含量

FFA含量(μmol/L)=1000x

(3) 组织FFA含量

(1) 按样本蛋白浓度计算

FFA含量(μmol/mg)=x÷Cpr

(2) 按样本鲜重计算

FFA含量(μmol/g鲜重)=x×V样总÷W

V样总:上清液总体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量,g。

注意事项:

1. 试剂三配制应尽量晚配,可在操作到加入试剂二时,再配制试剂三。

2. 必须保证每管的震荡频率及时间一致。

3. 尽量在30min内完成测量。

4. 上层溶液不可以直接加入到96孔板内,并且测完后要密封好再丢弃。

5. 因所用试剂多数为有机溶剂,同一支吸头多次吸取会造成体积不准确,建议更换吸头。

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