产品名称:乙醇脱氢酶(ADH)测试盒
产品规格:50管/48样,100管/96样
产品货号:YX-C-A007,YX-W-A007
免费咨询:0551-66107970
货号 |
产品名称 |
检测方法 |
规格 |
售价(元) |
YX-C-A007 |
乙醇脱氢酶(ADH)测试盒 |
紫外分光光度法 |
50管/48样 |
280 |
YX-W-A007 |
乙醇脱氢酶(ADH)测试盒 |
微量法 |
100管/96样 |
550 |
注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
ADH是生物体内短链醇代谢的关键酶,催化乙醇与乙醛可逆转换,在很多生理过程中起着重要作用。哺乳动物ADH主要在肝脏生成,肝脏损伤导致ADH释放到血清中。血清ADH活性高低反映了肝功能是否异常。
测定原理:
ADH催化NADH还原乙醛生成乙醇和NAD+,NADH 在340nm处有吸收峰,而NAD +没有;测定340nm 吸光度下降速率,来计算ADH活性。
自备仪器和用品:
研钵、冰、低温离心机、紫外分光光度计、1mL 石英比色皿、可调式移液器和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体×1 瓶,室温保存。
试剂二:液体×1 瓶,4℃保存。临用前把试剂三转移到试剂二中,4℃保存。
试剂三:粉剂×1 瓶,-20℃保存。
试剂四:液体×1 支,4℃保存。
粗酶液提取:
1、 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,
加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆。16000g,4℃离心 20min,取上清置冰上待测。
2、 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间 3min);16000g,4℃离心20min,取上清液置冰上待测。
3、血清等液体:直接测定。
ADH 测定操作:
1. 分光光度计预热30min,调节波长到340nm,蒸馏水调零。
2. 试剂二在25℃水浴中保温30min。
3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL 蒸馏水、800μL试剂二和100μL试剂四,迅速混匀后于340nm测定吸 光值变化,分别记录15s和75s时吸光值,分别记为A1和A2。△A空白管=A1-A2。。
4. 测定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL 试剂二和100μL试剂四,迅速混匀后于340nm 测定吸光值变化,分别记录 15s 和75s时吸光值,分别记为A3和A4。△A 测定管=A3-A4。
注意:空白管只需测定一次。
计算公式:
(1)按照蛋白浓度计算
活性单位定义:25℃中每毫克蛋白每分钟氧化 1μmol NADH 为 1 个酶活单位。
ADH (μmol/min/mg prot) =[(△A 测定管–△A空白管)÷ε÷d×V 反总×106] ÷(Cpr×V 样)÷T=1.61×(△A 测定管–△A空白管) ÷Cpr
(2)按照样本质量计算
活性单位定义:25℃中每克组织每分钟氧化 1μmolNADH 为1个酶活单位。
ADH (μmol/min/g) =[(△A 测定管–△A空白管)÷ε÷d×V 反总×106 ] ÷(W×V 样÷V 样总)÷T=1.61×(△A 测定管–△A空白管)÷W
(3)按细胞数量计算
活性单位定义:25℃中每104个细胞每分钟氧化1μmolNADH 为1个酶活单位。
ADH (μmol/min/104cell) = [(△A 测定管–△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×10 6 ] ÷(细胞数量×V 样÷V样总)÷T=1.61×(△A 测定管–△A 空白管) ÷细胞数量
(4)按液体体积计算
活性单位定义:25℃中每毫升血清每分钟氧化 1μmol NADH 为 1 个酶活单位。
ADH (μmol/min/mL) = [(△A 测定管–△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×106] ÷V 样÷T
=1.61×(△A 测定管–△A 空白管)
ε:NADH 摩尔消光系数,6.22×103 L/mol/cm;d:比色皿光径,1 cm;V 反总:反应体系总体积,1000μL=0.001 L;Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;V 样:加入反应体系中上清液体积,100μL=0.1 mL;T:反应时间,1min。
注意事项:
1. 上清液蛋白质浓度需要另外测定,建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。
2. 配制好的试剂二3天使用完。
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