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产品名称:乙醇含量检测试剂盒(WST-8法)

产品规格:50管/48样,100管/96样

产品货号:LE-1-332,LE-2-332

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

LE-1-332

乙醇含量测试盒

可见分光光度法

50/48

1080

LE-2-332

乙醇含量测试盒

微量法

100/96

1750

乙醇含量测试盒说明书(微量法

测定意义:

酒是含酒精(乙醇)饮料的统称,乙醇是酒的主要成分,是衡量酒质量的重要指标之一。我国是世界上最早发明酿酒的国家,也是酒类产品消费大国,其消费量居世界之首。因此, 快速、准确测定酒中乙醇含量,对于确保酒的质量和保护消费者的健康具有重大意义。

测定原理:

乙醇在乙醇脱氢酶的催化下氧化脱氢生成乙醛,同时,NAD 被还原生成 NADH,NADH 在1-mPMS 的作用下使 WST-8 显橙黄色,通过 450 nm 下测定吸光值变化可测得乙醇含量。

需自备的仪器和用品:

酶标仪、台式离心机、可调式移液器、96 孔板、研钵、冰、蒸馏水。

试剂的组成和配制:

试剂一:液体 12 mL×1 瓶,4℃保存;

试剂二:粉剂×1 瓶, -20℃保存;临用前加入 6 mL 试剂三充分溶解待用,用不完的试剂分装后-20℃保存;

试剂三:液体 10 mL×1 瓶,4℃保存;

试剂四:液体 1.5mL×1 管, 4℃避光保存。

乙醇提取:

1、组织:按照组织质量(g):蒸馏水体积(mL) 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织, 加入 1mL 蒸馏水),进行匀浆,8000g,25℃离心 10min,取上清待测。

2、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):蒸馏水体积(mL) 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 蒸馏水), 超声波破碎(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次) 8000g,25℃ 离心 10min,取上清待测。

3、血清(浆)等液体样品:直接测定。

测定步骤:

1、酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 450nm。

2、工作液的配制:临用前按照样本数量,按以下比例配制工作液

试剂名称

体积(μL

试剂一

100

试剂二

50

试剂四

10

3、样本测定

按下表在 96 孔板中加入如下试剂

试剂名称

体积(μL

样本

40

测定工作液

160

混匀后记录 450nm 下测定初始吸光值 A1,和 37℃避光孵育 10min 后的吸光值 A2,计算△A=A2-A1。

乙醇含量计算:

1、标准条件下测定回归方程为 y = 0.0256x + 0.0055 R2 = 0.9991 x 为乙醇含量(μmol/mL),y 为吸光值差值△A。

2、按照血清(浆)体积计算

乙醇含量(μmol/mL)= (△A-0.0055)÷0.0256=39.1×(△A-0.0055)

3、按照样品质量计算

乙醇含量(μmol/g 鲜重)= [ (△A-0.0055)÷0.0256×V1]÷(W ×V1÷V2)= 39.1×(△A-0.0055)÷W

4、按照细菌或细胞密度计算

乙醇含量(μmol/104 cell)= [ (△A-0.0055)÷0.0256×V1]÷(500×V1÷V2)=0.078×(△A-0.0055)

V1:加入反应体系中样本体积,0.04mL;V2:加入提取液体积,1 mL Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万;

注意事项:

1、测定前取 1-2 个样做预实验,若△A﹥0.3 或乙醇含量﹥10μmol/mL,需将样本用蒸馏水稀释后再测定,以确保测定的准确性。

2、最低检测限:0.02μmol/mL。


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