产品名称:中性木聚糖酶(NEX)测试盒
产品规格:50管/24样,100管/48样
产品货号:LE-1-112,LE-2-112
免费咨询:0551-66107970
货号 |
产品名称 |
检测方法 |
规格 |
售价(元) |
LE-1-112 |
中性木聚糖酶(NEX)测试盒 |
可见分光光度法 |
50管/24样 |
360 |
LE-2-112 |
中性木聚糖酶(NEX)测试盒 |
微量法 |
100管/48样 |
700 |
中性木聚糖酶(NEX)活性检测试剂盒说明书(可见分光光度法)
产品内容:
缓冲液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 10mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂二:液体 15mL×1 瓶,4℃避光保存
标准品:粉剂×1 支,4℃保存。10mg 木糖,临用前加入 667μL 蒸馏水配成 100μmol/mL 的标品溶液,再稀释 50 倍即得2μmol/mL 的木糖标准溶液,备用。
产品说明:
木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生,能催化水解木聚糖,也被称为戊聚糖酶或半 纤维素酶, 可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及β-葡聚糖,降低酿造中物料的粘度,促进有效物质的释放,以及降低饲料中的非淀粉多糖,促进营养物质的吸收利用,因而广泛的应用于酿造和饲料工业中,中性木聚糖酶(NEX)一般分离自最适生长 pH 为 6-8 的微生物。
NEX 在中性环境中催化木聚糖降解成还原性寡糖和单糖,在沸水浴条件下进一步与 3,5-二硝基水杨酸发生显色反应,在 540nm 处有特征吸收峰,反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比, 通过测定反应液在 540nm 吸光值增加速率,可计算 NEX 活力。
试验中所需的仪器和试剂:
低温离心机、可见分光光度计、水浴锅、1mL 玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、粗酶液提取:
1、细胞或微生物样品发酵液的制备:发酵液于 8000rpm,4℃,离心 15min,取上清,置于冰上待测。
2、组织:称取约 0.1g 组织,加入 1mL 缓冲液,冰上充分研磨。8000g,4℃离心 15min,取上清,置冰上待测。
3、酶干粉:称约 1mg,加缓冲液 1mL,震荡充分溶解。
二、测定步骤:
1、 可见分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 540nm,蒸馏水调零。
2、 将上清液/酶溶液用蒸馏水稀释十倍后置冰上待测。
3、 操作表:
加入试剂 |
对照管 |
测定管 |
标准管 |
空白管 |
样品(μL) |
200 |
200 |
|
|
标准溶液(μL) |
|
|
200 |
|
蒸馏水(μL) |
|
|
|
200 |
缓冲液(μL) |
300 |
300 |
300 |
300 |
试剂一(μL) |
- |
200 |
200 |
200 |
混匀,盖紧瓶盖,50℃水浴,反应 30min,立即沸水浴 10min 灭活。(注意不要让盖子 爆开,以免进水,改变了反应体系) |
||||
试剂一(μL) |
200 |
- |
|
|
试剂二(μL) |
300 |
300 |
300 |
300 |
混匀,沸水浴显色 5min(注意不要让盖子爆开,以免进水改变了反应体系),冰浴冷却后尽快测量 540nm 波长下的吸光值 A 对照管、A 测定管、A 标准管、A 空白管,计算ΔA 测定=A 测定管-A 对照管,ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。 |
三、NEX 计算公式
1、发酵液 NEX 活力计算:
酶活定义:50℃,pH 6.0 条件下每毫升发酵液每分钟分解木聚糖产生 1μmol 还原糖所需的酶量为一个中性木聚糖酶的活力单位。
NEX 活力(U/mL)=[ΔA 测定÷(ΔA 标准÷C 标准) ]÷T
=0.067×ΔA 测定÷ΔA 标准
2、酶干粉 NEX 活力计算:
酶活定义:50℃,pH 6.0 条件下,每毫克酶每分钟分解木聚糖产生 1μmol 还原糖所需的酶量为一个中性木聚糖酶的活力单位。NEX 活力(U/mg)=[ΔA 测定÷(ΔA 标准÷C 标准) ] ×V 样品×10÷(V 样品×W 酶÷V 提取)÷T
=0.67×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W 酶。
3、组织中 NEX 活力的计算:酶活定义:50℃,pH 6.0 条件下,每 mg 组织蛋白每分钟分解木聚糖产生 1μmol 还原糖所需的酶量为一个中性木聚糖酶的活力单位。
NEX 活力(U/mg prot)=[ΔA 测定÷(ΔA 标准÷C 标准) ] ×V 样品×10÷(V 样品×Cpr)÷T
=0.67×ΔA 测定÷ΔA 标准÷Cpr。
(2)按样品鲜重计算:
酶活定义:50℃,pH 6.0 条件下,每 g 组织每分钟分解木聚糖产生 1μmol 还原糖所需的酶量为一个中性木聚糖酶的活力单位。
NEX 活力(U/g 鲜重)=[ΔA 测定÷(ΔA 标准÷C 标准) ] ×V 样品×10÷(V 样品×W÷V 提取) ÷T
注意事项:
1、吸光度变化应该控制在 0.01~1.5 之间,否则加大样品量或稀释样品,注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变;也可以延长或者缩短反应时间。
2、试剂盒 2-8℃保存,保质期 3 个月,建议尽快使用。
相关新闻: |
版权所有 © 合肥莱尔生物科技有限公司 皖ICP备17006278号-2