产品名称:α-淀粉酶检测试剂盒
产品规格:50管/24样,100管/48样
产品货号:YX-C-C401,YX-W-C401
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货号
产品名称
检测方法
规格
售价(元)
YX-C-C401
α-淀粉酶测试盒
可见分光光度法
50管/24样
250
YX-W-C401
α-淀粉酶测试盒
微量法
100管/48样
480
α-淀粉酶(α-AL)活性检测试剂盒说明书(可见分光光度法)
注意:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
产品内容:
试剂一:液体 40mL×1 瓶,常温保存,若有黄色晶体析出,需加热溶解后再用;
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加入 20mL 蒸馏水,置于常温水中并加热至煮沸,期间不断搅拌粉剂至溶解;
标准品:粉剂×1 支,10mg 无水葡萄糖。临用前加 1mL 蒸馏水,配成 10mg/mL 葡萄糖标准液。
产品说明:
淀粉酶负责水解淀粉,包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)可随机地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷键,生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖,同时使淀粉的粘度降低,因此又称为液化酶。
淀粉水解酶催化淀粉水解生成还原糖,还原糖还原 3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质,在 540 nm 有吸收峰;通过测定 540 nm 吸光度增加速率,计算淀粉酶活性。α-AL 耐热,但是β-淀粉酶可在 70℃ 钝化 15min。因此粗酶液经过 70℃钝化 15min,就只有α-AL 能够催化淀粉水解。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵和蒸馏水。
操作步骤:
一、粗酶液提取:
称取约 0.1g 样本,加 0.8mL 蒸馏水匀浆;匀浆后在室温下放置提取 15min,每隔 5min 振荡 1 次,使其充分提取;6000g,常温离心 10min,吸取上清液并加蒸馏水定容至 10 mL,摇匀,即为淀粉酶原液。
二、测定步骤和加样表:
1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 540nm。
2、将葡萄糖标准液用蒸馏水稀释为 0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625、0.0078 和 0.0039 mg/mL的标准溶液。
3、按操作表依次加入各试剂:
试剂(μL) |
对照管 |
测定管 |
标准管 |
空白管 |
α- 淀粉酶原液 |
250 |
250 |
- |
- |
蒸馏水 |
- |
- |
- |
250 |
标准溶液(mg/mL) |
- |
- |
250 |
- |
70℃水浴 15min 左右,冷却 |
试剂一 |
500 |
- |
- |
- |
试剂二 |
250 |
250 |
250 |
250 |
在 40℃恒温水浴中准确保温 5min |
||||
试剂一 |
- |
500 |
500 |
500 |
三、α-淀粉酶活性计算:
1、标准曲线的绘制
以ΔA 标准为 y 轴,以标准溶液浓度为 x 轴,绘制标准曲线,得到方程 y=kx+b。将ΔA 测定带入方程得到 x(mg/mL)。
2、α- 淀粉酶活性的计算
(1) 按照样本鲜重计算
单位定义:每g 组织每分钟催化产生1mg 还原糖定义为1 个酶活力单位。
α- 淀粉酶活性(mg/min/g 鲜重)=x×V 样÷(W×V 样÷V 样总)÷T=2×x÷W
(2) 按照蛋白质浓度计算
单位定义:每mg 组织蛋白每分钟催化产生1mg 还原糖定义为1 个酶活性单位。
α-淀粉酶活性(mg/min/mg prot)= x×V 样÷(V 样×Cpr)÷T=0.2×x÷Cpr
V 样:加入反应体系中样本体积,0.25 mL;V 样总:提取液总体积,10 mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g;T:反应时间,5min。
注意事项:
当测定的吸光值大于 1 时,可以对样本进行适当稀释后测定。
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