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产品名称:ADPG焦磷酸化酶/腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(AGP)测试盒

产品规格:50管/48样,100管/96样,25管/24样

产品货号:YX-C-C403-50,YX-C-C403-25,YX-W-C403

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

YX-C-C403-50

ADPG焦磷酸化酶(AGP)测试盒

紫外分光光度法

50/48

2300

YX-C-C403-25

ADPG焦磷酸化酶(AGP)测试盒

紫外分光光度法

25管/24样

1600

YX-W-C403

ADPG焦磷酸化酶(AGP)测试盒

微量法

100管/96样

4400

腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(AGP)活性测定试剂盒说明紫外分光光度法

注意:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义

AGP (EC 2.7.7.21)主要存在于植物中,催化葡萄糖-1-磷酸与 ATP 反应生成淀粉合成的直接前体 ADPG,是植物淀粉生物合成的主要限速步骤。

测定原理

AGP催化的逆向反应生成 G1P,在反应体系中添加的磷酸己糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和 NADPH340nm下测定NADPH增加速率,即可计算AGP活性。

需自备的的仪器和用品

紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水

试剂的组成和配制

提取液:液体 60mL×1 瓶,4℃保存;

试剂一:液体 20mL×1 瓶,4℃保存;

试剂二:粉剂×1 支,4℃保存;临用前每支加入500μL蒸馏水充分溶解备用;用不完的试剂仍 4℃保存;

试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入3mL蒸馏水充分溶解备用;用不完的试剂仍4℃保存;

试剂四:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前每瓶加入6mL蒸馏水充分溶解备用;用不完的试剂仍 4℃保存;

试剂五:粉剂×1 瓶,-20℃保存;临用前每瓶加入6mL蒸馏水充分溶解备用;用不完的试剂仍-20℃保存;

试剂六:粉剂×1 支,-20℃保存;临用前每支加入500μL蒸馏水充分溶解备用;用不完的试剂 4℃保存;

试剂七:粉剂×1 支,-20℃保存;临用前每支加入500μL蒸馏水充分溶解备用;用不完的试剂 4℃保存;

粗酶液制备

按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL提取液),进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

测定步骤

1、分光光度计预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。

2、试剂一置30℃保温10min以上。

3、在EP管中按顺序加入下列试剂(如果一次性测定样本较多,可以将试剂一、二、三和四按比例配成混合液 1,将试剂一、五、六和七按比例配成混合液 2

试剂名称(μL

测定管

试剂一

100

试剂二

10

试剂三

50

试剂四

100

样本

20

混匀,30℃保温 15 min,置沸水浴中 1 min(盖紧,防止水分散失),冰浴迅速冷却

试剂一

300

试剂五

100

试剂六

10

试剂七

10

混匀后立即在 340 nm 波长下记录初始吸光度 A1 2min 后的吸光度 A2,计算 ΔA=A2-A1

AGP 活性计算

1、按样本蛋白蛋白浓度计算

单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活性单位。

AGPnmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反总÷ε×d×109]÷(V ×Cpr) ÷T=2813×ΔA÷Cpr

此法需要自行测定样本蛋白质浓度。

2、按照样本鲜重计算

单位的定义:每 g 组织每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。

AGPnmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷ε×d×109W× V ÷V 样总)÷T=2813×ΔA÷W

V 反总:反应体系总体积,7×10-4 LεNADPH 摩尔消光系数,6.22×103 L/mol/cmd:比色皿光径,1cmV 样:加入样本体积,0.02 mLV 样总:加入提取液体积,1 mLT:反应时间,2 minCpr:样本蛋白质浓度,mg/mLW:样本质量。



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