产品名称:ADPG焦磷酸化酶/腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(AGP)测试盒
产品规格:50管/48样,100管/96样,25管/24样
产品货号:YX-C-C403-50,YX-C-C403-25,YX-W-C403
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货号 |
产品名称 |
检测方法 |
规格 |
售价(元) |
YX-C-C403-50 |
ADPG焦磷酸化酶(AGP)测试盒 |
紫外分光光度法 |
50管/48样 |
2300 |
YX-C-C403-25 |
ADPG焦磷酸化酶(AGP)测试盒 |
紫外分光光度法 |
25管/24样 |
1600 |
YX-W-C403 |
ADPG焦磷酸化酶(AGP)测试盒 |
微量法 |
100管/96样 |
4400 |
注意:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义
AGP (EC 2.7.7.21)主要存在于植物中,催化葡萄糖-1-磷酸与 ATP 反应生成淀粉合成的直接前体 ADPG,是植物淀粉生物合成的主要限速步骤。
测定原理
AGP催化的逆向反应生成 G1P,在反应体系中添加的磷酸己糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和 NADPH,340nm下测定NADPH增加速率,即可计算AGP活性。
需自备的的仪器和用品
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水
试剂的组成和配制
提取液:液体 60mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 20mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1 支,4℃保存;临用前每支加入500μL蒸馏水充分溶解备用;用不完的试剂仍 4℃保存;
试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入3mL蒸馏水充分溶解备用;用不完的试剂仍4℃保存;
试剂四:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前每瓶加入6mL蒸馏水充分溶解备用;用不完的试剂仍 4℃保存;
试剂五:粉剂×1 瓶,-20℃保存;临用前每瓶加入6mL蒸馏水充分溶解备用;用不完的试剂仍-20℃保存;
试剂六:粉剂×1 支,-20℃保存;临用前每支加入500μL蒸馏水充分溶解备用;用不完的试剂 4℃保存;
试剂七:粉剂×1 支,-20℃保存;临用前每支加入500μL蒸馏水充分溶解备用;用不完的试剂 4℃保存;
粗酶液制备
按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL提取液),进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
测定步骤
1、分光光度计预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。
2、试剂一置30℃保温10min以上。
3、在EP管中按顺序加入下列试剂(如果一次性测定样本较多,可以将试剂一、二、三和四按比例配成混合液 1,将试剂一、五、六和七按比例配成混合液 2)
试剂名称(μL) |
测定管 |
试剂一 |
100 |
试剂二 |
10 |
试剂三 |
50 |
试剂四 |
100 |
样本 |
20 |
混匀,30℃保温 15 min,置沸水浴中 1 min(盖紧,防止水分散失),冰浴迅速冷却 |
|
试剂一 |
300 |
试剂五 |
100 |
试剂六 |
10 |
试剂七 |
10 |
混匀后立即在 340 nm 波长下记录初始吸光度 A1 和 2min 后的吸光度 A2,计算 ΔA=A2-A1。
AGP 活性计算
1、按样本蛋白蛋白浓度计算
单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活性单位。
AGP(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=2813×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
2、按照样本鲜重计算
单位的定义:每 g 组织每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
AGP(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W× V 样÷V 样总)÷T=2813×ΔA÷W
V 反总:反应体系总体积,7×10-4 L;ε:NADPH 摩尔消光系数,6.22×103 L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.02 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,2 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量。
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