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产品名称:肌酸激酶(CK)测试盒

产品规格:50管/48样,100管/96样

产品货号:LE-1-331,LE-2-331

产品报价:

免费咨询:0551-66107970

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

LE-1-331

肌酸激酶(CK)测试盒

分光光度法

50/48

800

LE-2-331

肌酸激酶(CK)测试盒

微量法

100管/96

1500

肌酸激酶测定试剂盒说明书(分光光度法

货号:LE-1-331

正式测定之前选择2-3 个预期差异大的样本做预测定。  

产品内容:

提取液:液体 60mL×1 瓶,4保存。 

试剂一:粉剂 1 瓶,4避光保存,使用前加15mL 蒸馏水溶解。 

试剂二:液体 15mL×1 瓶,4保存。 

工作液:临用前根据用量将试剂一和试剂二以1:1 混合。使用前37温育2min 

产品说明: 

CK(EC 2.7.3.2)主要存在于心脏、肌肉以及脑等组织中,能可逆地催化肌酸与ATP 之间的转磷酰基反应,在能量运转、肌肉收缩和ATP 再生中有重要作用,是临床诊断心脑疾病的一个重要指标。 CK 催化磷酸肌酸和ADP 生成肌酸和ATP,己糖激酶催化ATP 与葡萄糖形成6-磷酸葡萄糖, 6-磷酸葡萄糖脱氢酶催化6-磷酸葡萄糖与NADP+生成NADPH,导致340nm 光吸收值增加。 

自备实验用品及仪器: 

天平、低温离心机、恒温水浴锅、紫外分光光度计、1 mL 石英比色皿和蒸馏水。 

操作步骤:

一、 粗酶液提取 

1. 组织样本:按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例(建议称取约0.1g 组织,加入1mL 提取液)进行冰浴匀浆,然后10000g4离心15min,取上清,置冰上待测。 

2. 血清样本:直接测定。 

二、 测定操作表

 

空白管

测定管

酶液(μ L)

 

200

工作液(μ L)

500

500

H2O(μ L)

500

300

混匀,于1mL 石英比色皿,对照管调零,测定340nm 的初始值A1,测定完立即放入37水浴,准确计时,分别测定1min,2min,3min 时的吸光值A2,计算时取平均值,A= A2-A1。

注意:空白管只需测定一次。

三、 CK 活性计算公式

1、按组织蛋白含量计算

酶活定义:37pH7.0 时,每毫克蛋白质1min 内催化产生1nmol NADPH 为一个酶活单位。

CK 活性(nmol/min / mg prot)=△A ÷(e×d)×V 反总÷(V ×Cpr)= 804×A÷Cpr

2、按组织样本质量计算:

酶活定义:37pH7.0 时,每克样品1min 内催化产生1nmol NADPH 为一个酶活单位。

CK 活性(nmol/min /g)= △A ÷(e×d)×V 反总÷(V ÷V 样总×W)= 804×A÷W

3、按血清计算:

酶活定义:37pH7.0 时,每升血清1min 内催化产生1nmol NADPH 为一个酶活单位。

CK 活性(nmol/min /L)= △A ÷(e×d)×V 反总÷V ×1000= 804000×A

e:NADPH 微摩尔消光系数,6.22×10-3 L/μmol/cm;d:比色皿光径,1cm;V 反总:反应体系总体积,1mL;V 样:反应体系中样本体积,0.2mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g。

注意事项:

1. 配制好的工作液4℃稳定7 天,请尽量配制后尽快使用。

2. 血清的CK 不稳定,采集样本后尽快测定,4℃避光保存可稳定24h

3. 样品蛋白质含量需要另外测定,可选用BCA 蛋白含量测定试剂盒进行测定。

4. OD 值大于0.5 可用提取液适当稀释样品,并在计算公式中相应的改变稀释倍数。


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