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产品名称:肌酸激酶(CK)测试盒

产品规格:50管/48样,100管/96样

产品货号:LE-1-331,LE-2-331

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

LE-1-331

肌酸激酶(CK)测试盒

紫外分光光度法

50/48

800

LE-2-331

肌酸激酶(CK)测试盒

微量法

100管/96

1500

肌酸激酶(Creatine Kinase, CK)测定试剂盒说明书(微量法

测定意义:

CK(EC 2.7.3.2)主要存在于心脏、肌肉以及脑等组织中,能可逆地催化肌酸与ATP之间的转磷酰基反应,在能量运转、肌肉收缩和ATP再生中有重要作用,是临床诊断心脑疾病的一个重要指标。

测定原理:

CK催化磷酸肌酸和ADP生成肌酸和ATP,己糖激酶催化ATP与葡萄糖形成6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖脱氢酶催化6-磷酸葡萄糖与NADP+生成NADPH,导致340nm光吸收值增加。

自备实验用品及仪器:

天平、低温离心机、恒温水浴锅、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。

试剂组成和配制:

提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:粉剂 1 瓶,4℃避光保存,使用前加 10mL 蒸馏水溶解。

试剂二:液体 10mL×1 瓶,4℃保存。

工作液:临用前根据用量将试剂一和试剂二以 1:1 混合。使用前 37℃温育 2min

粗酶液提取:

1.  组织样本:按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后10000g4℃,离心15min

2.  血清样本:直接测定。

测定操作表:

1、分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长至340nm

2、操作表

 

空白管

测定管

酶液(μL

 

60

工作液(μL

150

150

H2O(μL

150

90

混匀,取200µL于微量石英比色皿/96孔板中,测定管调零,测定340nm的初始值A137℃反应 3min,分别测定 1min2min3min 时的吸光值A2 ,计算时取平均值,△A=A2-A1

注意:空白管只需测定一次。

CK 活性计算公式:

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1)按组织蛋白含量计算

酶活定义:37℃,pH7.0时,每毫克蛋白质1min内催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。

CK 活性(nmol/min/mg prot=A÷e÷d×V 反总÷(V 样×Cpr= 804×△A÷Cpr

2)按组织样本质量计算:

酶活定义:37℃,pH7.0时,每克样品1min内催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。

CK 活性(nmol/min/g=A÷e÷d×V 反总÷(V 样÷V 样总×W= 804×△A÷W

3)按血清计算:

酶活定义:37℃,pH7.0时,每升血清1min内催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。

CK 活性(nmol/min/L=A÷e÷d×V 反总÷V 样×1000= 804000×△A

eNADPH 微摩尔消光系数,6220 L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V 反总:反应体系总体积,0.3mLV 样:反应体系中样本体积,0.06mLCpr:样本蛋白浓度,mg/mLW:样本质量,g

b.用 96 孔板计算公式如下

1)按组织蛋白含量计算

酶活定义:37℃,pH7.0时,每毫克蛋白质1min内催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。

CK 活性(nmol/min/mg prot=A÷e÷d×V 反总÷(V 样×Cpr= 1608×△A÷Cpr

2)按组织样本质量计算:

酶活定义:37℃,pH7.0 时,每克样品1min内催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。

CK 活性(nmol/min/g=A÷e÷d×V 反总÷(V 样÷V 样总×W= 1608×△A÷W

3)按血清计算:

酶活定义:37℃,pH7.0时,每升血清1min内催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。

CK 活性(nmol/min/L=A÷e÷d×V 反总÷V 样×1000= 1608000×△A

eNADPH 摩尔消光系数,6220 L/mol/cm;d:96 孔板光径,0.5cm;V 反总:反应体系总体积,0.3mLV 样:反应体系中样本体积,0.06mLCpr:样本蛋白浓度,mg/mLW:样本质量,g

注意事项:

1. 配制好的工作液 4℃稳定 7 天,请尽量配制后尽快使用。

2. 血清的 CK 不稳定,采集样本后尽快测定,4℃避光保存可稳定 24h

3. 样品蛋白质含量需要另外测定,可选用 BCA 蛋白含量测定试剂盒进行测定。

4. OD 值大于 0.5 可用提取液适当稀释样品,并在计算公式中相应的改变稀释倍数。


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