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产品名称:土壤几丁质酶测试盒

产品规格:24样/48样

产品货号:YX-C-B917,YX-W-B917

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

YX-C-B917

土壤几丁质酶测试盒

可见分光光度法

50/24

650

YX-W-B917

土壤几丁质酶测试盒

微量法

100/48

1200

土壤几丁质酶(Soil Chitinase,S-Chitinase)试剂盒说明书
注意:正式测定之前选择2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

几丁质主要存在于虾、蟹、昆虫等甲壳类动物的外壳与软体动物的器官(例如乌贼的软骨), 以及真菌类的细胞壁中,而几丁质酶(EC 3.2.1.14)可催化几丁质水解,具有抵御真菌侵染的作用,成为抗真菌病害的研究热点。

测定原理:

几丁质酶水解几丁质产生 N-乙酰氨基葡萄糖,进一步与对二甲氨基苯甲醛产生红色化合物,在 544nm 处有特征吸收峰,吸光值增加速率反映了几丁质酶的活性。

自备实验用品及仪器:

天平、水浴锅、离心机、震荡仪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板, 甲苯、蒸馏水。

试剂组成和配制:

试剂一:液体 10mL×1 4℃保存。试剂二:液体 4mL×1 4℃保存。

试剂三:液体 65mL×1 瓶,4℃避光保存。

样品处理:

新鲜土样风干,过 30-50 目筛。

测定操作表:

 

对照管

测定管

土样(g)

0.1

0.1

甲苯(μ L)

15

15

混匀,25℃静置 15min

蒸馏水(μ L)

100

 

试剂一(μ L)

 

100

混匀,37℃培养 24h

蒸馏水(μ L)

200

200

4000rpm,4℃,离心 30min,取上清 200μ L 于新的 EP 管中

试剂二(μ L)

20

20

混匀,沸水浴 5min

试剂三(μ L)

600

600

混匀,37℃显色 20min,200μ L 于微量石英比色皿/96 孔板中,蒸馏水调零,

测定 544nm 处吸光值,记为 A 对照管和 A 测定管,Δ A=A 测定管-A 对照管。

 

计算公式:

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下


 

标准曲线:y=5.2714x-0.0007,R2=0.9989;x 为标准品浓度mg/mL)为吸光值Δ A。

酶活性定义:37℃条件下,每克土壤每天分解几丁质产生 1μ g N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活性单位。

土壤几丁质酶活性(μ g/d/g 土样)=(Δ A +0.0007)÷5.2714×V 反总÷W÷T×1000

= 598×(Δ A +0.0007)

V反总:反应体系总体积,0.315mL;W:样本质量,0.1g;T:反应时间,1d;1000:1mg/mL=1000μ  g/mL

b.  96 孔板测定的计算公式如下

标准曲线:y=2.6357x-0.0007,R2=0.9989;x 为标准品浓度(μ  g/mL)为吸光值Δ A。

酶活性定义:37℃条件下,每克土壤每天分解几丁质产生 1μ g N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活性单位。

土壤几丁质酶活性(μ g/d/g 土样)=(Δ A +0.0007)÷2.6357×V 反总÷W÷T×1000

= 1195×(Δ A +0.0007)

V反总:反应体系总体积,0.315mL;W:样本质量,0.1g;T:反应时间,1d;1000:1mg/mL=1000μ  g/mL

注意事项:

试剂一充分混匀后再使用。


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