产品名称：土壤几丁质酶测试盒
产品规格：24样/48样
产品货号：YX-C-B917,YX-W-B917
产品报价：
免费咨询：0551-66107970
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货号 |
产品名称 |
检测方法 |
规格 |
售价（元） |
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YX-C-B917 |
土壤几丁质酶测试盒 |
可见分光光度法 |
50管/24样 |
650 |
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YX-W-B917 |
土壤几丁质酶测试盒 |
微量法 |
100管/48样 |
1200 |
测定意义：
几丁质主要存在于虾、蟹、昆虫等甲壳类动物的外壳与软体动物的器官(例如乌贼的软骨)， 以及真菌类的细胞壁中，而几丁质酶(EC 3.2.1.14)可催化几丁质水解，具有抵御真菌侵染的作用，成为抗真菌病害的研究热点。
测定原理：
几丁质酶水解几丁质产生 N-乙酰氨基葡萄糖，进一步与对二甲氨基苯甲醛产生红色化合物，在 544nm 处有特征吸收峰，吸光值增加速率反映了几丁质酶的活性。
自备实验用品及仪器：
天平、水浴锅、离心机、震荡仪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板， 甲苯、蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。试剂二：液体 4mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：液体 65mL×1 瓶，4℃避光保存。
样品处理：
新鲜土样风干，过 30-50 目筛。
测定操作表：
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对照管 |
测定管 |
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土样（g） |
0.1 |
0.1 |
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甲苯（μ L） |
15 |
15 |
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混匀，25℃静置 15min |
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蒸馏水（μ L） |
100 |
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试剂一（μ L） |
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100 |
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混匀，37℃培养 24h |
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蒸馏水（μ L） |
200 |
200 |
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4000rpm，4℃，离心 30min，取上清 200μ L 于新的 EP 管中 |
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试剂二（μ L） |
20 |
20 |
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混匀，沸水浴 5min |
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试剂三（μ L） |
600 |
600 |
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混匀，37℃显色 20min，取 200μ L 于微量石英比色皿/96 孔板中，蒸馏水调零， 测定 544nm 处吸光值，记为 A 对照管和 A 测定管，Δ A=A 测定管-A 对照管。 |
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计算公式：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y=5.2714x-0.0007，R2=0.9989；x 为标准品浓度（mg/mL），y 为吸光值Δ A。
酶活性定义：37℃条件下，每克土壤每天分解几丁质产生 1μ g N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活性单位。
土壤几丁质酶活性（μ g/d/g 土样）=（Δ A +0.0007）÷5.2714×V 反总÷W÷T×1000
= 598×（Δ A +0.0007）
V反总：反应体系总体积，0.315mL；W：样本质量，0.1g；T：反应时间，1d；1000：1mg/mL=1000μ g/mL
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y=2.6357x-0.0007，R2=0.9989；x 为标准品浓度（μ g/mL），y 为吸光值Δ A。
酶活性定义：37℃条件下，每克土壤每天分解几丁质产生 1μ g N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活性单位。
土壤几丁质酶活性（μ g/d/g 土样）=（Δ A +0.0007）÷2.6357×V 反总÷W÷T×1000
= 1195×（Δ A +0.0007）
V反总：反应体系总体积，0.315mL；W：样本质量，0.1g；T：反应时间，1d；1000：1mg/mL=1000μ g/mL
注意事项：
试剂一充分混匀后再使用。
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