产品名称:土壤中性蛋白酶测试盒
产品规格:50管/24样,100管/48样
产品货号:YX-C-B908,YX-C-B908
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货号 |
产品名称 |
检测方法 |
规格 |
售价(元) |
YX-C-B908 |
土壤中性蛋白酶测试盒 |
可见分光光度法 |
50管/24样 |
680 |
YX-W-B908 |
土壤中性蛋白酶测试盒 |
微量法 |
100管/48样 |
1200 |
土壤中性蛋白酶活性检测试剂盒说明书(微量法)
注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
产品内容:
试剂一:液体20mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入10mL试剂一,沸水浴搅拌溶解后待用;
试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入10mL 蒸馏水充分溶解待用;
试剂四:液体20mL×1 瓶,4℃保存;
试剂五:液体5mL×1 瓶,4℃保存;
标准品:液体1mL×1 支,0.25 μmol/mL 酪氨酸溶液,4℃保存。
产品说明:
土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化,其水解产物是高等植物的氮源之一。土壤中性蛋白酶在中性环境下催化蛋白质水解,与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。中性条件下,土壤中性蛋白酶可将酪蛋白水解产生酪氨酸;在碱性条件下,酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝,在680nm 有特征吸收峰。
实验中所需仪器及设备:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液枪、微量比色皿/96孔板、蒸馏水、50目筛(或更小)。
样品处理:
新鲜土样自然风干或 37℃烘箱风干,过 30~50 目筛。
操作步驟:
1、分光光度计/酶标仪预热30min 以上,调节波长至680nm,蒸馏水调零。
2、样本测定:
试剂名称 |
测定管 |
对照管 |
标准管 |
空白管 |
风干土样(g) |
0.05 |
0.05 |
- |
- |
试剂一(μL) |
50 |
50 |
- |
- |
试剂二(μL) |
100 |
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- |
- |
混匀后,37℃反应24h,期间振荡5-6 次,使土样与反应液充分接触。 |
- |
- |
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试剂三(μL) |
100 |
100 |
- |
- |
试剂二(μL) |
- |
100 |
- |
- |
混匀,10000rpm 室温离心10min,取上清液 |
- |
- |
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上清液(μL) |
44 |
44 |
- |
- |
标准液(μL) |
- |
- |
44 |
- |
蒸馏水(μL) |
- |
- |
- |
44 |
试剂四(μL) |
130 |
130 |
130 |
130 |
试剂五(μL) |
26 |
26 |
26 |
26 |
混匀,40℃水浴 10min,10000rpm 室温离心 10min,取上清液于 680nm 下读取各管吸光值 A,分别记为 A 测定管、A 对照管、A 标准管、A 空白管,计算ΔA 测定=A 测定管-A 对照管,ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。 |
注意:标准管、空白管只需测一次。每个测定管设一个对照管
土壤中性蛋白酶活性计算:
单位定义:每天每g土样中产生1μmol 酪氨酸为一个土壤中性蛋白酶活力单位。
土壤中性蛋白酶(U/g)=C标准×ΔA测定÷ΔA标准×V 反总÷W÷T= 0.0625×ΔA测定÷ΔA标准÷W。C 标准管:标准管浓度,0.25 μmol/mL;V 反总:酶促反应总体积,0.25mL;T:反应时间, 1d;W:样本质量,g。
注意事项:
1、当吸光值大于1.5时,建议将上清液稀释后进行测定,计算时注意乘以稀释倍数。
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