产品名称:土壤中性蛋白酶测试盒
产品规格:24样/48样
产品货号:YX-C-B908,YX-C-B908
免费咨询:0551-66107970
货号 |
产品名称 |
检测方法 |
规格 |
售价(元) |
YX-C-B908 |
土壤中性蛋白酶测试盒 |
可见分光光度法 |
50管/24样 |
680 |
YX-W-B908 |
土壤中性蛋白酶测试盒 |
微量法 |
100管/48样 |
1200 |
测定意义:
土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化, 其水解产物是高等植物的氮源之一。S-NPT 在中性环境下催化蛋白质水解,与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。
测定原理:
中性条件下,S-NPT 可将酪蛋白水解产生酪氨酸;在碱性条件下,酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝;在 680nm 有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、微量石英比色皿/96 孔板、双蒸水
试剂组成和配置:
试剂一:液体 30mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入 5ml 蒸馏水充分溶解;用不完的试剂 4℃保存; 试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入 50μ L 试剂七使粉剂润湿,然后加入 10ml 试
剂一,转入烧杯中沸水浴磁力搅拌溶解后待用;用不完的试剂 4℃保存;
试剂四:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入 20ml 蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂 4℃ 保存;
试剂五:液体 3mL×1 瓶,4℃保存;
试剂六:液体 1.5mL×1 支,0.05mg/ml 标准酪氨酸溶液,4℃避光保存; 试剂七:液体 1.5mL×1 支,4℃保存;
样品处理:
新鲜土样自然风干或 37 度烘箱风干,过 30~50 目筛。
测定操作:
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 680nm,蒸馏水调零。
2、试剂二、三和四 40℃水浴 10min。
3、样本测定:
试剂名称 |
测定管 |
对照管 |
风干土样(g) |
0.01 |
0.01 |
试剂一(μ L) |
50 |
150 |
试剂三(μ L) |
100 |
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混匀后,40℃水浴 30min,振荡 5-6 次,使土样与反应液充分接触
试剂二(μ L) |
50 |
50 |
混匀,8000g 25℃离心 10min,取上清液,在 EP 管或 96 孔板中加入下列试剂
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测定管 |
对照管 |
标准管 |
上清液(μ L) |
30 |
30 |
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试剂六(μ L) |
|
|
30 |
试剂四(μ L) |
140 |
140 |
140 |
试剂五(μ L) |
30 |
30 |
30 |
混匀,40℃水浴 20min,680nm 下读取各管吸光值A
注意:标准管只需测一次。每个测定管设一个对照管。
S-NPT 活性计算:
单位定义:每天每g 土样中产生 1mg 酪氨酸为一个 S-NPT 活力单位。
S-NPT(mg/d/g)=C 标准×(A 测定管-A 对照管)÷A 标准管×V 反总÷W÷T=48×(A 测定管-A 对照管)÷A 标准管
C 标准管:标准管浓度,0.05mg/mL;V 反总:反应体系总体积,0.2mL;T:反应时间,30min=1/48d; W:样本质量,0.01g。
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