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产品名称:土壤酸性蛋白酶测试盒

产品规格:24样/48样

产品货号:YX-C-B907,YX-W-B907

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

YX-C-B907

土壤酸性蛋白酶测试盒

可见分光光度法

50/24

680

YX-W-B907

土壤酸性蛋白酶测试盒

微量法

100/48

1200

土壤酸性蛋白酶(Solid -Acid Protease,S-ACPT)试剂盒说明书
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化, 其水解产物是高等植物的氮源之一。S-ACPT 在酸性环境下催化蛋白质水解,与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。

测定原理:

酸性条件下,S-ACPT 可将酪蛋白水解产生酪氨酸;在碱性条件下,酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝;在 680nm 有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器:

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、微量石英比色皿/96 孔板、双蒸水

试剂组成和配置:

液体一:1mL×1 支,4℃保存。液体二:0.5mL×1 支,4℃保存。

试剂一的配制:临用前按液体一:液体二:蒸馏水=90(μ  L)20(μ  L)21(mL)的比例配制,现配现用,如出现白色絮状沉淀则不能用。

试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入 5ml 蒸馏水充分溶解;用不完的试剂 4℃保存; 试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入 50μ L 试剂七使粉剂润湿,然后加入 10ml 剂一,转入烧杯中沸水浴磁力搅拌溶解后待用;用不完的试剂 4℃保存;

试剂四:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入 20ml 蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂 4℃ 保存;

试剂五:液体 3mL×1 瓶,4℃保存;

试剂六:液体 1.5mL×1 0.05mg/ml 标准酪氨酸溶液4℃保存; 试剂七:液体 1.5mL×1 4℃保存;

样品处理:

新鲜土样自然风干或 37 度烘箱风干,过 30~50 目筛。

测定操作:

1、 试剂一的配制:见试剂的组成和配制。

2、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 680nm,蒸馏水调零。

3、试剂二、三和四 40℃水浴 10min。

3、样本测定:

试剂名称

测定管

对照管

风干土样(g)

0.01

0.01

试剂一(μ L)

50

150

试剂三(μ L)

100

 


 

混匀,40℃水浴 30min,振荡 5-6 次,使土样与反应液充分接触

试剂二(μ L)

50

50

混匀,8000g25℃离心 10min,取上清液,在 EP 管或 96 孔板中加入下列试剂

 

测定管

对照管

标准管

上清液(μ L)

30

30

 

试剂六(μ L)

 

 

30

试剂四(μ L)

140

140

140

试剂五(μ L)

30

30

30

混匀,40℃水浴 20min,680nm 下读取各管吸光值A 注意:标准管只需测一次。每个测定管设一个对照管。

S-ACPT 活性计算:

单位定义:每天每g 土样中产生 1mg 酪氨酸为一个 S-ACPT 活力单位。

S-ACPT(mg/d/g)=C 标准×(A 测定管-A 对照管)÷A 标准管×V 反总÷W÷T=48×(A 测定管-A 对照管)÷A 标准管

标准管:标准管浓度,0.05mg/mL;V 反总:反应体系总体积,0.2mL;T:反应时间,30min=1/48d; W:样本质量,0.01g。


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