土壤总磷/有机磷/无机磷含量测定试剂盒说明书（可见分光光度法）

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

试剂组成和配制：

试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。临用前用蒸馏水稀释 10  倍后再用。

试剂二：液体×1 瓶，4℃保存。

试剂三：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。临用前配制，加入 20 mL 蒸馏水，充分溶解后加入 10 mL试剂二，混匀。

标准品：液体×1 支，40 μg/ml  无机磷标准品，4℃保存。

产品说明：

土壤总磷包括有机磷和无机磷，其中无机磷能够直接被植物利用。土壤有机磷经过矿化分解而转化为无机磷。同时测定土壤总磷、有机磷和无机磷，可以全面反映土壤磷营养状况。

利用钼蓝法定磷。取一份土样，通过浸提法测定土壤无机磷含量；另外取一份土样，经高温灼烧后，土壤有机磷转化为无机磷，测得土壤总磷含量；总磷含量减去无机磷含量，即可计算出有机磷含量。

自备仪器和用品：

可见分光光度计、台式离心机、可调式水浴锅，分析天平、可调式移液器、550℃高温电炉，1mL 玻璃比色皿、蒸馏水、100 目筛子（可更小）。

操作步骤：

一、土壤不同形态磷提取：
1.无机磷：称取通过 100  目筛子的风干土样 0.1g，转移到 10 mL 离心管，加入 10mL 试剂一， 震荡混匀，然后置于 45℃水浴 1h，8000g，25℃离心 10min，取上清液一，用于无机磷含量测定。
2.总磷提取：取通过 100 目筛子的风干土样，550℃灼烧 1h，冷却后称取约 0.1g，转移到 10 mL 离心管，加入 10mL 试剂一，震荡混匀，然后置于 45℃水浴 1h，8000g，25℃，离心 10min， 取上清液二，用于总磷含量测定。

二、测定步骤：

1.分光光度计预热 30 min，调节波长到 660 nm，蒸馏水调零。
2.打开水浴锅，调节温度到 40℃。
3.空白管：取 EP 管，依次加入 500μL 蒸馏水，500μL 试剂三，混匀后置于 40℃水浴保温 10min， 室温冷却 10 min 后于660 nm 测定吸光度，记为 A 空白管。
4.标准管：取 EP 管，依次加入 50μL 标准液，450μL 蒸馏水，500μL 试剂三，混匀后置于 40℃
水浴保温 10min，室温冷却 10 min 后于 660 nm 测定吸光度，记为 A 标准管。
5.测定管：取 EP 管，依次加入 50μL 上清液一或者上清液二，450μL 蒸馏水，500μL 试剂三， 混匀后置于 40℃水浴保温 10min，室温冷却 10   min 后于 660   nm  测定吸光度，记为 A 测定管。
注意：空白管和标准管只需测定一次。

三、土壤磷含量计算：

1.土壤无机磷含量（μg /g）=[C  标准液×(A  测定管－A  空白管)÷(A  标准管－A  空白管)]×V 总÷W
=400×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)÷W
C 标准液：40μg/ml；W：土壤样品质量，g；V 总：上清液一总体积，10 mL。
2.土壤总磷含量（μg /g）=[C 标准液×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)]×V 总
÷W=400×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)÷W
C 标准液：40μg/ml；W：土壤样品质量，g；V 总：上清液二总体积，10 mL。
3.土壤有机磷（μg /g）=土壤总磷-土壤无机磷

注意事项：

试剂三配制过程中，可能会产生黑色固体，其不影响结果，注意吸取时不要将黑色固体吸入。