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产品名称:土壤中性磷酸酶(S-NP)测试盒

产品规格:50管/48样,100管/96样

产品货号:YX-C-B901,YX-W-B901

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

YX-C-B901

土壤中性磷酸酶(S-NP)测试盒

可见分光光度法

50/48

240

YX-W-B901

土壤中性磷酸酶(S-NP)测试盒

微量法

100/96

450

土壤中性磷酸酶(S-NP)活性测定试剂盒说明书
注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

土壤磷酸酶是催化土壤有机磷矿化的酶,其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性,是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。磷酸酶活性受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和 pH 的显著影响,根据最适 PH 范围,一般把土壤磷酸酶分为中性、酸性和碱性三种类型。

测定原理:

中性环境中,S-NP 催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠,通过测定酚的生成量即可计算出 NP 活性。

自备实验用品及仪器:

可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、台式离心机、37℃恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、冰、蒸馏水、乙醇和甲苯。

试剂组成和配制:

试剂一:液体×1 瓶,4℃避光保存。

试剂二:粉剂×1 4℃保存。用前加 100mL 蒸馏水充分溶解。试剂三:液体×1 4℃保存。

试剂四:粉剂×1 支,4℃避光保存。临用前加 576μ  L 无水乙醇(自备),24μ  L 蒸馏水充分溶解。(变褐色后不能再使用)

标准品:液体×1 支,0.5 μ mol/mL 酚标准液,4℃保存。

催化反应:

称取风干混匀土壤约 0.1g,加入 50μ L 甲苯(自备),轻摇 15min;加 400μ L 试剂一并且摇匀后,置于 37℃恒温培养箱,开始计时,催化反应 24h;到时后迅速加入 1mL 试剂二充分混匀,以终止酶催化的反应。8000g,25℃离心 10min,取上清液置于冰上待测。

显色反应:

1. 分光光度计预热 30 min 以上,调节波长到 660 nm,蒸馏水调零。

2. 空白管:取微量玻璃比色皿/酶标板,加入 10μ L 蒸馏水,20μ L 试剂三,4μ L 试剂四,充分混匀,显色后再加蒸馏水 166μ L,混匀后 25℃静置 30min, 660nm 测定吸光度,记为 A 空白管。

3. 标准管:取微量玻璃比色皿/酶标板,加入 10μ L 标准液,20μ L 试剂三,4μ L 试剂四,充分混匀,显色后再加蒸馏水 166μ L,混匀后 25℃静置 30 min, 660nm 测定吸光度,记为 A 标准管。

4. 测定管:取微量玻璃比色皿/酶标板,加入 10μ L 上清液,20μ L 试剂三,4μ L 试剂四,充分混匀,显色后再加蒸馏水 166μ L,混匀后室温 25℃30 min, 660nm 测定吸光度,记为 A 测定管。

注意:空白管和标准管只需测定一次。


 

S-NP 活性计算:

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

活性单位定义:37℃中每克土壤每天释放 1nmol 酚为 1 个酶活单位。

S-NP(nmol/d/g 干重)= [C 标准液×(A 测定管空白管)÷(A 标准管空白管)]×V 

÷W÷T

= 725×(A 测定管空白管)÷(A 标准管-空白管)÷W b.使用 96 孔板测定的计算公式如下

活性单位定义:37℃中每克土壤每天释放 1nmol 酚为 1 个酶活单位。

S-NP(nmol/d/g 干重)= [C 标准液×(A 测定管空白管)÷(A 标准管空白管)]×V 

÷W÷T

= 725×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 



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