土壤蔗糖酶(Solid-Sucrase, S-SC）试剂盒说明书(微量法)

注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

产品说明：

S-SC 能够水解蔗糖变成相应的单糖而被机体吸收，其酶促作用产物与土壤中有机质、氮、磷含量，微生物数量及土壤呼吸强度密切关，是评价土壤肥力的重要指标。

S-SC 催化蔗糖降解产生还原糖，进一步与 3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物， 在 540nm 有特征光吸收，在一定范围内 540nm 光吸收增加速率与 S-SC 活性成正比。

自备用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量比色皿/96 孔板、冰、甲苯（不允许快递）和蒸馏水。

产品内容：

试剂一：甲苯 1mL×1 瓶，4℃保存；（自备）

试剂二：液体 7.5mL×1 瓶，4℃保存；

试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前每瓶加入 22mL 双蒸水充分溶解备用；

试剂四：液体 30mL×1 瓶，4℃保存；

标准品：粉剂×1 支，4℃保存，含 10mg 无水葡萄糖（干燥失重<0.2%），临用前加入 1mL 蒸馏水溶解备用，4℃可保存 1 周，或者用饱和苯甲酸溶液溶解，可保存更长时间。

标准品准备：将标准品用蒸馏水稀释至 0.5、0.4、0.3、0.2、0.1mg/mL。

操作步骤：

1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。

2、测定步骤和加样表：

充分混匀，放入沸水浴中煮沸 5min（盖紧，以防止水分散失），流水冷却后充分混匀。

标准曲线的建立：

540nm 处蒸馏水调零，读标准管吸光值，计算 A=A 标准管-A 空白管。以浓度（y） 为纵坐标，吸光度 A（x）为横坐标建立标准曲线。

样品处理：

540nm 处蒸馏水调零，取 200ul 至微量比色皿或 96 孔板中读吸光值 A。计算ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管需设一个对照管。

S-SC 活性计算：

根据标准曲线，将ΔA 带入公式中（x）计算样品浓度 y（mg/mL）。

单位的定义：37℃,每天每 g 土样中产生 1mg 还原糖定义为一个 S-SC 活力单位。

S-SC 活力（U /g 土样）＝ y×10×V 反总÷W÷T =100×y

10：稀释倍数；T：反应时间，1d； V 反总：反应体系总体积：0.3mL；W：样品质量，0.03g。