产品名称:土壤硝酸还原酶(S-NR)测试盒
产品规格:50管/24样,100管/48样
产品货号:YX-C-B938,YX-W-B938
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货号 |
产品名称 |
检测方法 |
规格 |
售价(元) |
YX-C-B938 |
土壤硝酸还原酶(S-NR)测试盒 |
可见分光光度法 |
50管/24样 |
500 |
YX-W-B938 |
土壤硝酸还原酶(S-NR)测试盒 |
微量法 |
100管/48样 |
950 |
测定意义:
土壤亚硝酸还原酶是反硝化作用中的关键酶之一,参与亚硝酸盐至 NO 的还原反应,它的活性反映了生物降解过程中氮素的转化效率,为氮素转化规律的研究提供一定的依据。
测定原理:
亚硝酸还原酶可将 NO2—还原为 NO,使样品中参与重氮化反应生成紫红色化合物的 NO2—减少,即 540nm 处吸光值的变化可反应土壤中亚硝酸还原酶的活性。
自备实验用品及仪器:
天平、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、水浴锅、低温离心机。
试剂的组成和配制:
试剂一:液体 4mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加 4mL 蒸馏水溶解。
试剂三:液体 4mL×1 瓶,4℃保存。(如出现沉淀可以 70-80℃加热溶解)
试剂四:液体 10mL×1 瓶,4℃避光保存。(如出现沉淀可以 70-80℃加热溶解) 试剂五:液体 10mL×1 瓶,4℃避光保存。
工作液:临用前根据用量将试剂四和试剂五以 1:1 的比例混合。
样品处理:
新鲜土样自然风干或 37 度烘箱风干,过 30~50 目筛。
测定操作表:
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空白管 |
对照管 |
测定管 |
风干土样(g) |
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0.02 |
0.02 |
蒸馏水(μ L) |
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40 |
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试剂一(μ L) |
40 |
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40 |
试剂二(μ L) |
40 |
40 |
40 |
混匀后,25℃反应 1h |
|||
试剂三(μ L) |
40 |
40 |
40 |
充分震荡 30S,10000rpm,4℃,离心 10min |
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上清液(μ L) |
70 |
70 |
70 |
工作液(μ L) |
140 |
140 |
140 |
充分混匀,测定 540nm 各管吸光值,分别记为 A 空白管、A 对照管、A 测定管。空白管只要做一管,每个测定管需设一个对 照管。 |
计算公式:
a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线:y = 1.5562x+ 0.0088,R2 = 0.996;x 为标准品浓度(μ mol/mL),y 为吸光值(A标准管-A 空白管)。
酶活单位定义:每g 土样每天还原 1μ mol NO2ˉ 的量为一个酶活力单位。
S-NiR(μ mol /d /g 土样)=[A 空白管-(A 测定管-A 对照管) -0.0088]÷1.5562×V 标÷W÷T
= 0.617×[A 空白管-(A 测定管-A 对照管) -0.0088]÷W
T:反应时间,1h=1/24d;V 标:标准液体积,0.04mL;W:样本质量,g。
b. 使用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线:y = 0.7781x+ 0.0088,R2 = 0.996;x 为标准品浓度(μ mol/mL),y 为吸光值(A标准管-A 空白管)。
酶活单位定义:每g 土样每天还原 1μ mol NO2ˉ 的量为一个酶活力单位。
S-NiR(μ mol /d /g 土样)=[A 空白管-(A 测定管-A 对照管) -0.0088]÷0.7781×V 标÷W÷T
= 1.234×[A 空白管-(A 测定管-A 对照管) -0.0088]÷W
T:反应时间,1h=1/24d;V 标:标准液体积,0.04mL; W:样本质量,g。
注意事项:
1. 配制好的工作液 3 天内使用完。
2. 若吸光值超过 1.5,将上清液进行适当的稀释后再加入工作液显色,并在计算公式中乘以稀释倍数。
3. 严格控制显色时间,否则会对结果有影响。
4. 标准曲线线性范围为 0.03μ mol/mL-1.5μ mol/mL。
5. A 空白管-(A 测定管-A 对照管)线性范围为 0.02-1.5。
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