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产品名称:糖原合成酶(GCS)试剂盒

产品规格:50管/48样,100管/96样

产品货号:YX-C-C600,YX-W-C600

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价

YX-C-C600

糖原合成酶(GCS)测试盒

紫外分光光度法

50/48

1000

YX-W-C600

糖原合成酶(GCS)测试盒

微量法

100/96

1900

糖原合成酶(Glycogen synthase,GCS)试剂盒说明书(微量法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

GCS(EC 2.4.1.11)催化 UDPG 和葡萄糖残基生成糖原和 UTP, α -1,4-糖苷键相连延长糖链,是肝和肌肉糖原合成酶的限速酶,是胰岛素作用的主要靶酶,对糖代谢的调节和血糖稳态的维持具有重要作用。

测定原理:

GCS 催化 UDPG 和葡萄糖残基生成糖原和 UDP,丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶进一步依次催化NADH 氧化生成 NAD+,在 340nm 下测定 NADH 下降速率,即可反映 GCS 活性。

自备实验用品及仪器:

分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

提取液:100mL×1 瓶,4℃保存;

试剂一:液体 18 mL×1 瓶, 4℃保存; 

试剂二:液体 2.5mL×1 4℃保存; 

试剂三:液体 16.4uL×1 4℃保存; 

试剂四:粉剂×1 支, -20℃保存;

试剂五:粉剂×1 支, -20℃保存;

样本的前处理:

按照组织质量g):提取液体积(mL) 1:5~10 的比例建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

测定步骤:

1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。

2、工作液的配制:临用前将试剂三和试剂四转移到试剂一中混合溶解待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

3、试剂五的配制:临用前在试剂五中加入 1mL 试剂二充分溶解待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

4、将工作液和试剂五置于 37℃预热 5 分钟。

5、在 1mL 微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μ L 样本、10μ L 试剂五和 180μ L 工作液,立即混匀,记录 340nm 处初始吸光值A1  1min 后的吸光值 A2,计算 Δ A=A1-A2。

注意:

在该试剂盒中,若Δ A 大于 0.1,需将样本用提取液稀释适当倍数后测定,使 Δ A 小于0.1 可提高检测灵敏度。计算公式中乘以相应稀释倍数。

GCS 活性计算:
用微量石英比色皿测定的计算公式如下
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位定义:每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1nmol NADH 定义为一个酶活力单位。GCS(nmol/min/mg prot)=[Δ A×V 反总÷(ε  ×d)×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=3215×Δ A÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算
单位定义:每g 组织每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
GCS ( nmol/min/g 鲜 重 ) = [Δ A×V 反总 ÷ ( ε ×d ) ×109]÷(W ×V 样 ÷V 样总)÷T=3215×Δ A÷W
V 反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε :NADH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d: 比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.01 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,1 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位定义:每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1nmol NADH 定义为一个酶活力单位。GCS(nmol/min/mg prot)=[Δ A×V 反总÷(ε  ×d)×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=6430×Δ A÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算
单位定义:每g 组织每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
GCS ( nmol/min/g 鲜 重 ) = [Δ A×V 反总 ÷ ( ε ×d ) ×109]÷(W ×V 样 ÷V 样总)÷T=6430×Δ A÷W
V 反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε :NADH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d: 96 孔板光径,0.5cm;V 样:加入样本体积,0.01mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,1 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。

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