维生素E 含量检测试剂盒说明书（可见分光光度法 ）                 

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

规格：50T/24S

产品简介：

维生素 E（Vitamin E）是一种天然脂溶性抗氧化剂，能阻断机体不饱和脂肪酸的过氧化，维持 不饱和脂肪酸细胞膜的完整性和正常功能，并可清除超氧阴离子自由基，具有延缓衰老、预防溶血 性贫血等作用，在医药、化妆品、保健品、食品行业具有较高的应用价值。

VE还原Fe3+为Fe2+，Fe2+与1,10-菲罗啉产生有色络合物，在510nm有特征吸收峰。

试验中所需的仪器和试剂：

可见分光光度计、天平、台式离心机、1mL 玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、漩涡震荡仪、无水乙醇、正庚烷、蒸馏水和 EP 管。

产品内容：

试剂一： 无水乙醇 30 mL×1 瓶， 自备； 室温保存；

试剂二： 正庚烷 30 mL×1 瓶， 自备； 室温保存；

试剂三： 液体 30 mL×1 瓶，4℃避光保存；

试剂四： 液体 7 mL×1 瓶，4℃避光保存；

试剂五： 粉剂×1 瓶，4℃保存；

试剂五贮备液的制备：将试剂五的粉剂溶于 2 mL 无水乙醇配置成贮备液，4℃避光保存待用。 试剂五应用液的制备：取试剂五贮备液用无水乙醇 20 倍稀释后使用，建议当天配置当天使用。 试剂六： 液体 20 mL×1 瓶，4℃保存；

标准品： 液体 20 mg×1 支，-20℃避光保存。临用前加入 1 mL 试剂三，配成 20 mg/mL 的标准品溶液。

操作步骤：

一、维生素 E 的提取：

（1）组织样本

（2）血清（血浆） 样本

二、测定步骤：

1 、 分光光度计预热 30 min 以上，调节波长至 510 nm ，无水乙醇调零。

2 、 将 20 mg/mL 标准液用试剂三稀释为 50 、25 、12.5 、6.25 、3.125 µg/mL 的标准溶液备用。

3 、 操作表： （在 1.5 mL 离心管中依次加入下列试剂）

维生素 E 含量计算

1 、 标准曲线的绘制：

以各个标准溶液的浓度为 x 轴，其对应的ΔA 标准为 y 轴， 绘制标准曲线， 得到标准方程 y=kx+b， 将ΔA 带入方程得到 x （ μg/mL）。

2 、 维生素 E 含量的计算：

（1） 按样本质量计算

VE 含量（ μg /g 鲜重） =x×4×V 样总÷W = 2x÷W

（2） 按血清（血浆） 体积计算

VE 含量（ μg /mL）= x×4×V 样总÷V 血清（浆） = 10x

4：待测样本为 300 µL 的正庚烷抽提液加 900 µL 的无水乙醇，相当于将抽提样本稀释 4 倍后检测； V 样总：提取过程加入正庚烷的体积，0.5 mL；W：样本质量，g；V 血清（浆）： 提取过程中加入血清（浆）体积，0.2mL 。

注意事项

1 、离心后，在吸取上层正庚烷抽提液时，切勿将中间无水乙醇与水的液相层吸入，以免影响试验 结果。

2 、若ΔA>0.8 ，建议将样品用试剂三进行适当的稀释，并在计算公式中乘以稀释倍数。

3 、若反应体系产生沉淀，建议将待测样本用试剂三进行适当的稀释，并在计算公式中乘以稀释倍 数

4 、检测过程中，比色皿需用无水乙醇冲洗，勿用蒸馏水以防出现分层影响试验数据。

5 、显色结束后尽快完成测定。