β-葡萄糖醛酸苷酶（β-GD)活性检测试剂盒（微量法）

注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

产品内容：

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：粉剂×1 瓶，-20℃保存； 临用前每瓶加入 12mL 双蒸水，充分溶解备用； 用不完的试剂仍-20℃保存。

试剂二： 液体 15mL×1 瓶，4℃保存。

试剂三： 液体 15mL×1 瓶，4℃保存。

标准品： 液体 1mL×1 支，5μmol/mL 的对硝基苯酚溶液。

产品说明：

β-GD广泛存在于动物组织中，是一种参与肿瘤侵袭和转移过程的基质降解酶，具有水解固醇葡萄

糖醛酸和酸性粘多糖等生理功能。该酶在肝细胞中含量较高。此外在胃癌组织中含量 丰富，测定胃液β-GD活性对于研究胃癌具有重要的意义。

β-GD 分解对-硝基苯-β-D- 吡喃葡萄糖醛酸苷生成对-硝基苯酚，后者在 400nm 有最大吸收峰， 通过测定吸光值升高速率来计算β-GD 活性。

试验中所需的仪器和试剂：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研 钵、冰和蒸馏水

操作步骤：

一、粗酶液提取：

1 、细菌或培养细胞的处理： 收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清； 按照每 1000 万细菌或细胞 加入 1mL 提取液， 超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3s ，间隔10s，重复30 次），15000g ， 4℃， 离心20min ，取上清，置冰上待测。

2 、组织的处理： 称取约0.2g 组织， 加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆； 15000g，4℃，离心20min ，取上 清，置冰上待测。

3 、标准样品的准备： 取 100μL 标准液，加入到400μL 试剂三中，得到 1μmol/mL 标准液，十倍稀释 到 100nmol/mL ，用蒸馏水倍比稀释： 50 、25 、12.5 、6.25nmol/mL 。100 、50 、25 、12.5 、6.25 、 0nmol/mL 做标准液。

二、测定步骤

1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至400nm ，蒸馏水调零。

2、加样表

充分混匀，放入 37℃准确水浴 30min 后，立即放入沸水浴中煮沸 5min （盖紧，以防止水分散失），流水冷却后充分混匀（以保证浓度不变）

充分混匀，8000g ，4℃ ，离心 5min ，取上清液（在 EP 管或 96 孔板中加入下列试剂）

充分混匀，室温静置 2min 后，400nm 处测定吸光值 A ，计算ΔA=A 测定管-A 对照管。

三、β-GD 活力计算：

1 、标准曲线建立：

根据标准管的浓度（y）和吸光度（减去浓度为 0 标准管的 OD 值，x），建立标 准曲线。

2 、根据标准曲线，将ΔA（x ）带入公式计算样品产物浓度（nmol/mL）。

（1） 按样本蛋白浓度计算：

单位的定义： 每 mg 组织蛋白每小时产生 1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

β-GD 活力(U/mg prot)=(y×V 反总)÷(V 样×Cpr)÷T=20×y÷Cpr

需要另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。

（2） 按样本鲜重计算：

单位的定义： 每 g 组织在每小时产生 1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

β-GD 活力(U/g 鲜重) = (y×V 反总)÷(W×V 样÷V 样总)÷T=20×y÷W

（3） 按细菌或细胞数量计算：

单位的定义： 每 1 万个细菌或细胞每小时产生 1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

β-GD 活力(U/104 cell)=(y×V 反总)÷(1000×V 样÷V 样总)÷T=0.02×y

Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；V 反总： 反应体系总体积，0.3mL；V 样： 加入反应体系中样本体 积，0.03mL；V 样总： 加入提取液体积，1mL；W：样品鲜重，g；1000：细胞或细菌总数，1000 万； T：反应时间，0.5h。