碱性木聚糖酶（BAX）活性检测试剂盒说明书（可见分光光度法）

产品内容：

缓冲液：液体 60mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 7mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂二：液体 10mL×1 瓶，4℃避光保存。
标准品：粉剂×1 支，4℃保存。10mg 木糖。临用前加入 667µL 蒸馏水配制成 100µmol/mL 的木糖标准液。再稀释 50 倍即 2µmol/mL 的木糖标准溶液备用。

产品说明：

木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生，能催化水解木聚糖，也被称为戊聚糖酶或半 纤维素酶， 可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及β-葡聚糖，降低酿造中物料的粘度，促进有效物质的释放，以及降低饲料中的非淀粉多糖，促进营养物质的吸收利用，因而广泛的应用于酿造和饲料工业中，碱性木聚糖酶（BAX）一般分离自最适生长 pH 为 9-11 的微生物。
BAX 在碱性环境中催化木聚糖降解成还原性寡糖和单糖，在沸水浴条件下进一步与 3,5-二硝基水杨酸发生显色反应，在 540nm 处有特征吸收峰，反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比， 通过测定反应液在 540nm 吸光值增加速率，可计算 BAX 活力。

需自备的仪器和用品：

天平、低温离心机、恒温水浴锅，可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板和蒸馏水。

操作步骤：
一、粗酶液提取
1. 发酵液：发酵液于 8000rpm，4℃，离心 15min，取上清，作为待测样品。
2. 酶干粉：称约 1mg，加 1mL 缓冲液溶解，8000rpm，4℃，离心 15min，取上清蒸馏水稀释 10 倍待测。。
3. 组织样品：称约 0.1g 组织，加入 1mL 缓冲液，冰上充分研磨。8000rpm，4℃，离心 15min，取上清蒸馏水稀释 10 倍待测。

二、测定步骤
1、可见分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。
2、样本测定（在 EP 管中加入下列试剂）

三、BAX 活性计算：

1、发酵液 BAX 活力计算：
酶活定义：50℃，pH 9.0 条件下，每毫升发酵液每分钟分解木聚糖产生 1µmol 还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。
BAX 活力（U/mL）=C 标准×（A 测定-A 对照）÷（A 标准-A 空白）÷T=0.067×（A 测定-A 对照）÷（A 标准-A 空白）
C 标准：木糖标准溶液浓度，2µmoL/mL；T：反应时间，30min。
2、酶干粉 BAX 活力计算：
酶活定义：50℃，pH 9.0 条件下，每毫克酶每分钟分解木聚糖产生 1µmol 还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。
BAX 活力（U/mg）= 10×C 标准×（A 测定-A 对照）÷（A 标准-A 空白）×V 提取÷W1÷T=0.67×（A 测定-A 对照）÷（A 标准-A 空白）÷W1
10：样本稀释倍数，10 倍；C 标准：木糖标准溶液浓度，2µmoL/mL；V 提取：加入缓冲液体积，1mL；W1：酶干粉重量，mg；T：反应时间，30min。
3、组织中 BAX 活力计算：
酶活定义：50 ℃，pH 9.0 条件下，每 mg 组织蛋白每分钟分解木聚糖产生 1µmol 还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。
ACX 活力（U/mg prot）= 10×C 标准×（A 测定-A 对照）÷（A 标准-A 空白）×V 样品÷（V 样品×Cpr）÷T=0.67×∆A 测定÷∆A 标准÷Cpr
（1）按样品鲜重计算：
酶活定义：50℃，pH 9.0 条件下，每克组织每分钟分解木聚糖产生 1µmol 还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。
BAX 活力（U/g 鲜重）= 10×C 标准×（A 测定-A 对照）÷（A 标准-A 空白）×V 提取÷W2÷T=0.67×（A 测定-A 对照）÷（A 标准-A 空白）÷W2
10：样本稀释倍数，10 倍；C 标准：木糖标准溶液浓度，2µmoL/mL；V 提取：加入缓冲液体积，1mL；W2：样本鲜重，g；T：反应时间，30min；Cpr：样品蛋白浓度，mg/mL；V 样品：加入的样品体积，0.06mL。

注意事项：

2、试剂盒 2-8℃保存，保质期 3 个月，建议尽快使用。