植物总酚（TP）含量检测试剂盒说明书(可见分光光度法)

产品内容：

提取液：60%乙醇， 自备。

试剂一：液体 20mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：液体 25mL×1 瓶，4℃保存。

标准品：液体 1mL×1 支，4℃保存。1mg/mL 单宁酸标准溶液。

产品说明：

植物酚类物质具有清除自由基，抗氧化抗衰老的作用，具有较高的营养价值和医疗保健作用而 广泛应用于化妆品、食品、医药等领域。

在碱性条件下， 酚类物质将钨钼酸还原，产生蓝色化合物，在 760nm 处有特征吸收峰，测760nm 处的吸光值，即可得样品总酚含量。

自备实验用品及仪器：

天平、烘箱、粉碎仪、筛子、超声破碎仪、60%乙醇、离心机、可见分光光度计、1 mL 玻璃比 色皿、蒸馏水。

操作步骤：

一、总酚提取

将样本烘干至恒重，粉碎，过 40 目筛之后，称取约 0. 1g ，加入 2.5mL 提取液，用超声提取法进 行提取，超声功率 300W ，破碎 5s ，间歇 8s ，60℃ ，提取 30min 。12000rpm ，25℃，离心 10min ， 取上清，用提取液定容至 2.5mL ，待测。

二、标准品制备：

将 1mg/mL 单宁酸标准溶液二倍稀释至 0.3125、0. 1562、0.0781、0.0391、0.0195、0.0098、0.0049、 0.0024 、0.0012 、0.0006mg/mL ，待测。

三、测定操作表

1 、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 760nm ，蒸馏水调零。

2 、操作表

空白管只测一次。

四、总酚含量计算

1 、标准曲线绘制：

以不同浓度的单宁酸为 x 轴，ΔA（A 标准-A 空白） 为 y  轴绘制标准曲线 y= kx+b。

2 、植物总酚含量计算：

将ΔA=A 测定-A 对照带入标准曲线，求 x(mg/mL)。

（1） 按样本鲜重计算

总酚含量（mg/g  鲜重） = x×V 提取÷W= 2.5x÷W

（2） 按样本蛋白浓度计算

总酚含量（mg/mg prot）= x×V 提取÷ （V 提取×Cpr）= x ÷Cpr

V 提取： 提取液体积，2.5 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g。

注意事项：

（1） OD 值大于 1.0 ，样品适当稀释再测定，注意计算公式里乘以稀释倍数。

（2） 试剂一对皮肤有一定的刺激性，请操作时做好防护措施。