产品名称:蔗糖磷酸合成酶(SPS)试剂盒
产品规格:50管/24样,100管/48样
产品货号:YX-C-B505,YX-W-B505
免费咨询:0551-66107970
货号 |
产品名称 |
检测方法 |
规格 |
售价(元) |
YX-C-B505 |
蔗糖磷酸合成酶(SPS)测试盒 |
可见分光光度法 |
50管/24样 |
700 |
YX-W-B505 |
蔗糖磷酸合成酶(SPS)测试盒 |
微量法 |
100管/48样 |
1350 |
蔗糖磷酸合成酶(Sucrose phosphate synthase,SPS) 试剂盒说明书(微量法)
正式测定管前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
规格:100管/48样
测定意义
蔗糖不仅是重要的光合产物,也是植物体内运输的主要物质,还是碳水化合物的贮存形式 之一。SPS(EC 2.4.1.14) 以果糖-6-磷酸为受体,形成的蔗糖磷酸在蔗糖磷酸酶的作用下形 成蔗糖。一般把蔗糖磷酸酯合成酶-蔗糖磷酸酶系统看作是蔗糖合成的主要途径。
测定原理
蔗糖磷酸合成酶催化果糖-6-磷酸形成蔗糖磷酸,蔗糖磷酸与间苯二酚反应可呈现颜色变化,在480nm下有特征吸收峰,酶活力大小与颜色的深浅成正比。
需自备的的仪器和用品
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、离心机、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰
试剂的组成和配制
提取液: 液体 100mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一: 液体 2.5mL×1 瓶,-20℃保存;
试剂二: 1000μg/mL 蔗糖溶液 10mL×1 瓶,4℃保存;
试剂三: 液体 2mL×1 瓶,4℃保存
试剂四: 液体 25mL×1 瓶,4℃保存;
试剂五: 液体 6mL×1 瓶,4℃保存;
样品测定的准备:
按照组织质量(g) :提取液体积(mL)为1: 5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL 提取液) ,进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
测定步骤
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至480nm,蒸馏水调零。
2、样本测定(在 EP 管中依次加入下列试剂) :
试剂名称(μL) |
测定管 |
对照管 |
标准管 |
空白管 |
样本 |
10 |
10 |
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蒸馏水 |
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45 |
45 |
55 |
试剂二 |
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10 |
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试剂一 |
45 |
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混匀,25℃准确水浴 10min |
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试剂三 |
15 |
15 |
15 |
15 |
沸水浴中煮沸 10min 左右(盖紧,以防止水分散失) ,冷却 |
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试剂四 |
210 |
210 |
210 |
210 |
试剂五 |
60 |
60 |
60 |
60 |
混匀,沸水浴30min,冷却后,取200μL至微量石英比色皿或96孔板中,480nm下测定各管吸光值。
标准管和空白管只要做一管。
每个测定管需要设一个对照管
SPS 活力单位的计算
1、按照蛋白浓度计算
单位定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1μg蔗糖定义为一个酶活力单位。
SPS 活性(μg /min/mg prot)= {C 标准管×V1× (A 测定管-A 对照管)÷ (A 标准管-A 空白管)) ÷(V1×Cpr)÷T=100× (A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷Cpr
2、按照样本鲜重计算
单位定义: 每g组织每分钟催化产生1μg蔗糖定义为一个酶活力单位。
SPS 活性(μg /min/g 鲜重) = {C 标准管×V1× (A 测定管-A 对照管)÷ (A 标准管-A 空白 管)) ÷(W×V1÷V2)÷T=100×(A 测定管-A 对照管)÷ (A 标准管-A 空白管)÷W
C 标准管: 标准管浓度,1000μg/mL; V1: 加入反应体系中样本体积,0.01mL; V2: 加入提取液体积,1mL; Cpr: 样本蛋白质浓度,mg/mL; W: 样本鲜重,g; T :反应时间: 10min。
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