本试剂盒仅限于科研使用,请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。
严格按照实验说明书操作,并佩戴一次性手套和口罩。
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检测原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被抗体的微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
试剂盒规格及配置
名称
96孔配置
48孔配置
微孔酶标板
12孔×8条
12孔×4条
标准品
0.3mL*6管
0.3mL*6管
样本稀释液
6mL
3mL
检测抗体-HRP
10mL
5mL
20×洗涤缓冲液
25mL
15mL
底物A
6mL
3mL
底物B
6mL
3mL
终止液
6mL
3mL
封板膜
2张
2张
说明书
1份
1份
自封袋
1个
1个
自备物品
①.酶标仪(450nm)
②.高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
③.37℃恒温箱
操作步骤
①.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
②.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
③.样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加。
④.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
⑤.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板
机洗板)。
⑥.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
⑦.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
结果判断
绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。
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