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地址:合肥市包河经济开发区花园大道17号

产品名称:纤维素(CLL)试剂盒

产品规格:50管/48样,100管/96样

产品货号:YX-C-B634,YX-W-B634

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

YX-C-B634

纤维素(CLL)试剂盒

可见分光光度法

50管/48

500

YX-W-B634

纤维素(CLL)试剂盒

微量法

100管/96

950

纤维素(CLL)含量试剂盒说明书(可见分光光度法
注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
货号:YX-C-B634
规格:50T/48S 
正式测定前取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
纤维素是由葡萄糖组成的大分子多糖,通常与半纤维素、果胶和木质素结合在一起,是植物细胞壁的主要结构成分。纤维素是一种重要的膳食纤维,是自然界中分布最广、含量最多的
一种多糖。
测定原理:
纤维素为β-葡萄糖残基组成的多糖,在酸性条件下加热能分解成β-葡萄糖。β-葡萄糖在强酸作用下,可脱水生成β-糠醛类化合物。β-糠醛类化合物与蒽酮脱水缩合,生成糠醛衍生物。颜色的深浅可间接定量测定纤维素含量。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、80%乙醇、丙酮、浓硫酸(不
允许快递)、研钵和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
试剂一:液体 50mL× 1 瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃避光保存。
试剂三:液体 10mL× 1 支,4℃保存。
标准品:粉剂10mg× 1支,4℃保存;含 10mg 无水葡萄糖(干燥失重<0.2%),临用前加入 1mL 蒸馏水溶解,配制成 10mg/mL 葡萄糖溶液备用,4℃可保存 1 周,或者用饱和苯甲酸溶液溶解,可保存更长时间。
样品的前处理:
1、细胞壁的提取:取约 0.3g 样本(计为M1),加入 1mL 80%乙醇,室温快速匀浆,95℃水浴 20min,冷却至室温,4000g 25℃离心 10min,弃上清。沉淀加入 1.5mL80%乙醇和丙酮各洗一遍(涡旋振荡 2min 左右,4000g 25℃离心 10min,弃上清即可),沉淀即为粗细胞壁,加入 1mL 试剂一(去除淀粉)浸泡 15 小时,4000g 25℃离心 10min,弃上清,1mL 80%乙醇洗涤两次,弃上清,将沉淀干燥,称重得细胞壁物质(CWM质量计为M2)。
2、纤维素的提取:称取烘干的 CWM 约 5mg(计为W),加入 0.5mL 蒸馏水充分匀浆,匀浆液转移至 EP 管中,用蒸馏水定容至 0.5mL,置于冰水浴中,缓慢加入 0.75mL 浓硫酸,混匀,冰水浴中静置 30min。8000g 4℃离心 10min,取上清液,用蒸馏水稀释 20 倍后待测。
标准溶液准备:
将 10mg/mL 葡萄糖标准液进行二倍稀释得到 0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125、
0.00156mg/mL 标准溶液备用。
测定步骤:
1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 620nm,蒸馏水调零。
2、调节水浴锅至 95 度。
3、工作液的配制:在试剂二中加入 4mL 试剂三,充分溶解,如较难溶解,可加热搅拌;用
不完的试剂 4℃保存一周;
4、加样表(在 EP 管中反应):

试剂(μL

标准管

测定管

样本

 

300

标准品

300

 

工作液

70

70

浓硫酸

630

630

混匀,置 95度水浴中 10min(盖紧,以防止水分散失),冷却至室温后,于 620nm 读数


纤维素含量计算:
1、标准曲线绘制:
以 0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125、0.00156mg/mL 葡萄糖标准溶液为横坐标,ΔA 为纵坐标绘制标准曲线,得到线性回归方程 y=kx+b,将ΔA´代入方程得到 x(mg/mL);
2、按细胞壁干重计算
纤维素含量(mg/mg 鲜重)=x×稀释倍数×V 提取÷W
3、按总样本质量计算
纤维素含量(mg/mg 鲜重)=x×稀释倍数×V 提取÷W×M1÷M2
V 提取:提取后体积,1.25mL;W:样品质量,mg;稀释倍数:20;M1:总样本质量,g;M2:细胞壁物质CWM,g
 
注意事项
1. 加热过程中有剧烈反应,震荡时轻摇,以免压力过大喷出造成人生伤害。
2. 浓硫酸具有强腐蚀性,建议戴防护手套操作。
3. 如样本OD值大于1.5,可在纤维素提取过程中扩大稀释倍数,计数过程中乘以对应的稀释倍数。

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