H2S 含量测定试剂盒说明书（微量法）

注意：正式测定之前选择预期差异大的样本做预实验

规格: 100T/96S

产品内容：

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：液体 5mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂三：液体 5mL×1 瓶，4℃保存。

试剂四：液体 1mL×1 管，4℃避光保存。

标准品：粉剂 3mg×1 管，4℃避光保存

产品说明：

H2S 是一种新型气态信号分子，存在于脑内的神经递质，生理浓度的 H2S  对神经系统海马的 长时程增强功能具有重要的调节作用，并对自发性高血压、出血性休克及肝硬化等疾病的过程发挥 着重要的病理生理效应。

H2S 与醋酸锌、N, N-二甲基对苯二胺和硫酸铁铵等反应生成亚甲基蓝，亚甲基蓝在 665nm 处 有最大吸收峰，通过测定其吸光值可计算 H2S  含量。

需自备的仪器和用品：

天平、低温离心机、可见分光光度计或酶标仪、微量比色皿或96孔板、蒸馏水。

操作步骤：

一、样品处理：

a.    组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~ 10  的比例（建议称取约 0. 1g  组织， 加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g ，4℃离心 10min ，取上清，置冰上待测。

b.   细菌、真菌：按照细胞数量（10 4 个）：提取液体积（mL）为 500~ 1000：1 的比例（建议 500 万 细胞加入 1mL  提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w ，超声 3  秒，间隔 7 秒，总时间 3min）； 然后 10000g ，4℃ ，离心 10min ，取上清置于冰上待测。

c.    血清（浆）： 直接测定。

二、测定步骤： （取 1.5ml 离心管，按照下表操作）

d.    临用前将标准品加入1ml蒸馏水充分溶解则为12.5μmol /mL H2S标准品溶液，稀释100倍后为 0. 125μmol /mL标准品溶液(现配现用)

三、H2S 含量计算公式：

（1） 按蛋白浓度计算

H2S含量（ μmol /mg prot）=0. 125×(A测定－A空白)÷(A标准－A空白) ÷Cpr 

（2） 按样本质量计算

H2S含量（ μmol /g）=0. 125×(A测定－A空白)÷(A标准－A空白) ÷W

（3） 按细胞数量计算

H2S含量（μmol/104 cell）=0.125×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)÷细胞数量 

（4） 按照液体体积计算

H2S含量（ μmol /mL）=0. 125×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)

注意事项：

如样本OD值大于标准品OD ，可稀释样本或增大标准品浓度