产品名称:半胱氨酸(Cys)测试盒
产品规格:50管/48样,100管/96样
产品货号:YX-C-A905,YX-W-A905
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货号 |
产品名称 |
检测方法 |
规格 |
售价(元) |
YX-C-A905 |
半胱氨酸(Cys)含量测试盒 |
可见分光光度法 |
50管/48样 |
350 |
YX-W-A905 |
半胱氨酸(Cys)含量测试盒 |
微量法 |
100管/96样 |
650 |
试剂一:液体 15mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存。用前 1 天,向试剂二中加 2mL 蒸馏水充分溶解,再加磷酸 0.5mL, 混匀后盖紧(防止水分散失)沸水浴 2h;冷却后加 8mL 蒸馏水,4℃可保存 2 周。
标准品:粉剂×1 支,10mg 半胱氨酸,4℃保存。
产品说明:
蛋白质含有三种含硫氨基酸:甲硫氨酸、胱氨酸和半胱氨酸(Cys)。其中,Cys 是唯一一种含有巯基的含硫氨基酸,从甲硫氨酸转化而来,并且可与胱氨酸互相转化。Cys 参与蛋白质二硫键的形成,经常是蛋白质活性中心的组成部分,还可以为其它生理生化反应提供巯基。此外,Cys 大量积聚在皮肤和粘膜表面,在角蛋白生成中维持重要的巯基酶的活性,并且补充巯基,以维持皮肤的正常代谢,调节表皮最下层的色素细胞生成的底层黑色素。具有美白、解毒、改善炎症和过敏性皮肤等作用。
Cys 还原磷钨酸生成钨蓝,在 600nm 处有吸收峰;通过 600nm 吸光度,计算 Cys 含量。
试验所需自备仪器和用品:
低温离心机、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、磷酸和蒸馏水。
操作步骤:
一、半胱氨酸提取:
1、液体样品中半胱氨酸提取:取 0.2mL 液体样品,加提取液 0.3mL,充分混匀,11000 rpm 4℃离心 10min,取上清液,待测。
2、组织中半胱氨酸提取:称取约 0.2 g 组织,加入提取液 0.5 mL,冰上充分研磨,11000 rpm 4℃离心 10 min,取上清液待测。
二、测定操作:
1. 可见分光光度计/酶标仪预热 30 min 以上,调节波长到 600 nm,蒸馏水调零。
2. 标准液的配制:将标准品加入 0.826mL 蒸馏水,可得到 100µmol/mL 的标准液,稀释为 40、20、10、8、4、2、1、0.5 µmol/mL 浓度的标准溶液。
3. 按下表加入各试剂
试剂名称(µL) |
测定管 |
标准管 |
空白管 |
样本 |
40 |
|
|
标准品 |
|
40 |
|
蒸馏水 |
|
|
40 |
试剂一 |
100 |
100 |
100 |
试剂二 |
60 |
60 |
60 |
混匀后室温静置 15 min,于 600nm 处测定吸光值。
三、样品中半胱氨酸含量计算:
1、 标准曲线的绘制:
以各标准溶液浓度为 x 轴,以∆A(A 标准管-A 空白管)为 y 轴做标准曲线,得到方程 y=kx+b。将(A 测定管-A 对照管)带入方程求 x 值。
2、 半胱氨酸含量计算:V 样 1:提取体系中加入的样本体积,0.2mL;V 样 2:反应体系中加入的样本体积,0.04mL; V 样总:提取体系体积,0.5mL。W:样品质量,g。
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