产品名称:脯氨酸(PRO)含量测试盒
产品规格:50管/48样,100管/96样
产品货号:YX-C-A605,YX-W-A605
免费咨询:0551-66107970
货号 |
产品名称 |
检测方法 |
规格 |
售价(元) |
YX-C-A605 |
脯氨酸(PRO)含量测试盒 |
可见分光光度法 |
50管/48样 |
580 |
YX-W-A605 |
脯氨酸(PRO)含量测试盒 |
微量法 |
100管/96样 |
1100 |
试剂一:冰乙酸 4℃保存。(自备)
试剂二:液体 45 mL×1 瓶, 4℃保存。
试剂三:甲苯 4℃保存。(自备)
标准品:脯氨酸 10mg,4℃保存。
产品说明:
脯氨酸(Pro)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,逆境条件下,植物体内 Pro 含量显著增加。Pro 增加量在一定程度上反映了抗逆性,抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此, 脯氨酸增加量可以作为抗逆育种的生理指标之一。
用磺基水杨酸(SA)提取 Pro,加热处理后,Pro 与酸性茚三酮溶液反应生成红色;加甲苯萃取后,在 520nm 测定吸光度。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、冰乙酸、甲苯、研钵、冰和蒸馏水。
样品测定的准备:
1、细胞、细菌或组织样品的制备 :
细菌或细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,弃上清;按照每 100 万细菌或细胞加入 1mL 提取液, 超声波破碎细菌或细胞(功率 20%,超声 3 秒,间隔 10 秒,重复 30 次),之后置沸水浴振荡提取 10min;10000g,常温离心 10min,取上清,冷却后待测。
组织:称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆;之后置沸水浴振荡提取 10min,10000g, 常温离心 10min,取上清,冷却后待测。
2、血清(浆)样品:取 100μL 血清(浆)加入 0.9mL 提取液,充分混匀,之后置沸水浴振荡提取10 分钟,10000g,常温离心 10 分钟,取上清,冷却后待测。
3、标准品的处理:称取 1mg,将标准品稀释为 15、10、8、6、4、2、1、0 μg/ml。
测定步骤:
1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 520nm,甲苯调零。
2、取 0.5mL 上清液(或稀释后的标准品)+0.5mL 试剂一+0.5mL 试剂二于有盖试管中,置沸水浴中保温 30min(盖紧,防止水分散失),每 10min 振荡一次。
3、待冷却后,在试管中加入 1mL 试剂三,振荡 30s,静置片刻,使色素转至试剂三中;吸取 0.8mL-1mL
上层溶液于 1mL 玻璃比色皿中,于 520nm 波长处比色,记录吸光值。
4、根据标准品吸光值和浓度,建立标准曲线。
Pro 含量计算:
1、通过标准曲线计算样品脯氨酸含量(y 为脯氨酸含量,μg/mL;x 为 OD 值)
2、按照细菌、细胞个数或者组织鲜重计算,首先根据标准曲线求得 y 值: 细胞或细菌中脯氨酸含量(μg/104 cell)= y÷细胞浓度(104 cell/mL)Pro 含量(μg/g mass) =y÷样本鲜重(g/mL)
3、血清(浆)中脯氨酸含量,首先根据标准曲线求得 y 值:
Pro 含量[μg/mL 血清(浆)] = y÷0.1mL 血清(浆)/mL
注意:提取液中含有蛋白沉淀剂,提取的上清液不能用于蛋白浓度的测定。
相关新闻: |
版权所有 © 合肥莱尔生物科技有限公司 皖ICP备17006278号-2