植物脱氢酶(Plant dehydrogenase, pDHA) 试剂盒说明书(可见分光光度法)

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

规格：50 管/24 样

测定意义

生物体的脱氢酶(Plant dehydrogenase , DHA)的活性在很大程度上反映了生物体的活性 状态，能直接表示生物细胞对其基质降解能力的强弱。

测定原理

受氢体 2,3,5-氯化三苯基四氮唑 (2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride，即 TTC) 在细胞呼吸过程中接受氢以后，其还原产物三苯基甲鐟 (TriphenylFormazone，即 TF) 呈现 红色，在波长 485nm 处有最大吸收峰，测定其 485nm 吸光值，即得植物脱氢酶活性。

需自备实验仪器及用品

恒温培养箱或水浴锅、低温离心机、研钵、滤纸、可见分光光度计、1mL 比色皿、冰、蒸 馏水和乙酸乙酯 (不允许快递，请用户自备)。

试剂的组成和配制

试剂一：粉剂×2 瓶，使用前加少量水溶解，定容至 60mL，避光、4℃保存 (尽量现配现用）

试剂二：液体 60mL×6，4℃保存。

试剂三：乙酸乙酯， 自备。

样品处理

称取 0.5-1g 的植物组织，用双蒸水清洗 3-4 次，用滤纸吸干水分，备用。

测定步骤和操作表

脱氢酶活力计算

酶活单位定义：

在 37℃时，每小时每克样品使反应体系 OD 值每增加 0.01 为一个酶活单位。 

计算公式：脱氢酶活性 (U/g ·h) = (OD_{485 测定}-OD_{485 对照}) ÷0.01 ÷样品质量(g) ÷反应时间 (h)

注意事项

1. 配制好的试剂一避光保存于 4℃ ，尽量在一周内使用，若出现红色，则不能使用。

2. 试剂三易挥发，有毒，为了您的健康，请穿实验服，戴口罩，戴乳胶手套操作。

3. 反应完成后立即冰浴以终止反应，并去除干净残留的反应液。

4. 如果测定出来的吸光值较大，需把样品适当稀释再进行测定。

5. 试剂盒 2-8℃保存。