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产品名称:山梨醇含量试剂盒

产品规格:50管/48样,100管/96样

产品货号:YX-C-B607,YX-W-B607

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

YX-C-B607

山梨醇含量试剂盒

可见分光光度法

50/48

320

YX-W-B607

山梨醇含量试剂盒

微量法

100管/96样

600

山梨醇含量试剂盒说明书(微量法

正式测定前务必取 2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

山梨醇广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,不仅是糖运输形式之一,而且与生物抗逆性和食物风味密切相关。因此,在糖代谢、抗逆性和食品研究中经常需要检测山梨醇含

量变化。

测定原理:

山梨醇在碱性溶液中与铜离子形成蓝色络合物,在 655nm波长有特征吸收峰。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

试剂一:液体 3.5mL×1 瓶,4℃保存;

试剂二:液体 3.5mL×1 瓶 ,4℃保存。

山梨醇的提取:

按照组织质量(g):蒸馏水体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL蒸馏水),研磨成匀浆,95℃水浴 10 分钟(盖紧,以防止水分散失),冷却后,8000g,25℃离心 10min,取上清液待测。

测定步骤

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至655nm,蒸馏水调零。

2、加样表(在EP管中依次加入下列试剂):

试剂(μL)

空白管

测定管

试剂一

35

35

试剂二

35

35

样本

 

230

蒸馏水

230

 

混匀后室温静置 15min,8000g,25℃离心 10min,取 200μL 上清液至微量石英比色皿或 96

孔板中,测 655nm下吸光值 A,计算 ΔA=A 测定管-A 空白管。空白管只要做一管。

山梨醇含量计算:

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、标准条件下测定回归方程为y=0.352x-0.002;x 为标准品浓度(mg/mL),y 为吸光值。

2、按照样品质量计算

山梨醇含量(mg/g 鲜重)=[(ΔA+0.002)÷0.352×V1]÷(W×V1÷V2)

=2.84×(ΔA+0.002) ÷W

3、按照样本蛋白浓度计算

山梨醇含量(mg/mg prot)=[(ΔA+0.002) ÷0.352×V1]÷(V1×Cpr)

=2.84×(ΔA+0.002) ÷Cpr

V1:加入样本体积,0.23mL;V2:加入提取液体积,1 mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g

b.用96孔板测定的计算公式如下

1、标准条件下测定回归方程为y =0.176x - 0.002;x为标准品浓度(mg/mL),y为吸光值。

2、按照样品质量计算

山梨醇含量(mg/g 鲜重)=[(ΔA+0.002) ÷0.176×V1]÷(W×V1÷V2)

=5.68×(ΔA+0.002) ÷W

3、按照样本蛋白浓度计算

山梨醇含量(mg/mg prot)=[(ΔA+0.002) ÷0.176×V1]÷(V1×Cpr)

=5.68×(ΔA+0.002) ÷Cpr

V1:加入样本体积,0.23mL;V2:加入提取液体积,1 mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g

注意:最低检测限为 1μg/g 鲜重或0.01μg/mg prot

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