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尿素氮(BUN)试剂盒说明书


注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

尿素是生物体内含氮化合物分解的终产物,在尿酶催化下分解转化成氨。血液尿素氮是肾功能的主要指标之一。

测定原理

在碱性条件下,尿酶水解尿素产生氨,氨与次氯酸反应生成氯胺,再与酚衍生物作用生成绿色吲哚酚,在 630nm 处有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器

天平、研钵、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅。

试剂组成和配制

标准品:液体 1mL×1 支,4℃保存。

试剂一:粉剂×1 瓶,4℃避光保存,临用前加 4mL 蒸馏水充分溶解。

试剂二:液体 8mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂三:液体 8mL×1 瓶,4℃避光保存。

样品处理

1. 组织:按照质量(g):蒸馏水体积(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL蒸馏水)加入蒸馏水,匀浆后于25℃,10000g 离心10min,取上清待测。

2. 细胞:按照细胞数量(104个):蒸馏水体积(mL)为500~10001的比例(建议500万细胞加入1mL蒸馏水),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后 4℃,10000g离心10min,取上清置于冰上待测。

3. 血清或其它液体:直接检测。

测定操作

 

空白管

标准管

测定管

样品(μL

 

 

20

标准品(μL

 

20

 

H 2 O(μL

20

 

 

试剂一(μL

40

40

40

充分混匀,于 37℃反应 10min

试剂二(mL

70

70

70

试剂三(mL

70

70

70

充分混匀,于37℃显色10min,于微量石英比色皿/96孔板,双蒸水调零,测定630nm处吸光值,记为A空白管、A标准管和A测定管

注意:空白管和标准管只需测定一次。

 

计算公式

1. 按样本质量计算

尿素氮含量(mg/g=(A测定管- A空白管) ÷(A标准管- A空白管)×C 标准品÷W

= 0.005×(A测定管- A空白管) ÷(A标准管- A空白管)÷W

2. 按细胞数量计算

尿素氮含量(mg/104cell=(A测定管- A空白管) ÷(A标准管- A空白管)×C标准品÷细胞数量= 0.005×(A测定管- A空白管) ÷(A标准管- A空白管)÷细胞数量

3. 按液体体积计算

尿素氮含量(mg/L=(A测定管- A空白管) ÷(A标准管- A空白管)×C 标准品

=5×(A测定管- A空白管) ÷(A标准管- A空白管)

C 标准品:标准品浓度,5mg/LW:样品质量,g

注意事项

1. 配制好的试剂一在2-8℃条件下可保存一周。

2. 最低检出限为80μg/L

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