测定意义：

土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷化合物矿化的酶，其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和 pH 显著影响。通常按照其最适 pH 范围，分为碱性、中性和酸性三种类型磷酸酶。

测定原理：

碱性环境中，S-AKP/ALP 催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠，通过测定酚的生成量即可计算出S-AKP/ALP 活性。

自备实验用品及仪器：

可见光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、台式离心机、37℃恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、冰、蒸馏水、无水乙醇和甲苯。

试剂组成和配制：

试剂一：液体×1 瓶，4℃避光保存。

试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存。用前加 100mL 蒸馏水充分溶解。试剂三：液体×1 瓶，4℃保存。

试剂四：粉剂×1 支，4℃避光保存。临用前加 576μ  L 无水乙醇（自备），24μ  L 蒸馏水充分溶解。（变褐色后不能再使用）

标准品：液体×1 支，0.5μ mol/mL 苯酚标准液，4℃保存。

催化反应：

称取风干混匀土壤约 0.1g，加入 50μ L 甲苯（自备），轻摇 15min；加 400μ L 试剂一并且摇匀后，置于 37℃恒温培养箱，开始计时，催化反应 24h；到时后迅速加入 1mL 试剂二充分混匀，以终止酶催化的反应。8000g，25℃离心 10min，取上清液置于冰上待测。

显色反应：

1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min，调节波长到 660 nm，蒸馏水调零。

2. 空白管：取微量玻璃比色皿/酶标板，加入 10μ L 蒸馏水，20μ L 试剂三，4μ L 试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水 166μ L，混匀后 25℃静置 30 min，于 660 nm 测定吸光度，记为 A 空白管。

3. 标准管：微量玻璃比色皿/酶标板，加入 10μ L 标准液，20μ L 试剂三，4μ L 试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水 166μ L，混匀后 25℃静置 30 min，于 660 nm 测定吸光度，记为 A 标准管。

4. 测定管：微量玻璃比色皿/酶标板，加入 10μ L 上清液，20μ L 试剂三，4μ L 试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水 166μ L，混匀后 25℃静置 30 min，于 660 nm 测定吸光度，记为 A 测定管。

注意：空白管和标准管只需测定一次。