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产品名称:土壤碱性磷酸酶(S-AKP/ALP)测试盒

产品规格:50管/48样,100管/96样

产品货号:YX-C-B902,YX-W-B902

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

YX-C-B902

土壤碱性磷酸酶(S-AKP/ALP)测试盒

可见分光光度法

50管/48样

240

YX-W-B902

土壤碱性磷酸酶(S-AKP/ALP)测试盒

微量法

100管/96样

450

土壤碱性磷酸酶(S-AKP/ALP)活性测定试剂盒说明书(微量法)
注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷化合物矿化的酶,其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性,是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和 pH 显著影响。通常按照其最适 pH 范围,分为碱性、中性和酸性三种类型磷酸酶。

测定原理:

碱性环境中,S-AKP/ALP 催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠,通过测定酚的生成量即可计算出S-AKP/ALP 活性。

自备实验用品及仪器:

可见光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、台式离心机、37℃恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、冰、蒸馏水、无水乙醇和甲苯。

试剂组成和配制:

试剂一:液体×1 瓶,4℃避光保存。

试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存。用前加 100mL 蒸馏水充分溶解。试剂三:液体×1 瓶,4℃保存。

试剂四:粉剂×1 支,4℃避光保存。临用前加 576μ  L 无水乙醇(自备),24μ  L 蒸馏水充分溶解。(变褐色后不能再使用)

标准品:液体×1 支,0.5μ mol/mL 苯酚标准液,4℃保存。

催化反应:

称取风干混匀土壤约 0.1g,加入 50μ L 甲苯(自备),轻摇 15min;加 400μ L 试剂一并且摇匀后,置于 37℃恒温培养箱,开始计时,催化反应 24h;到时后迅速加入 1mL 试剂二充分混匀,以终止酶催化的反应。8000g,25℃离心 10min,取上清液置于冰上待测。

显色反应:

1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min,调节波长到 660 nm,蒸馏水调零。

2. 空白管:取微量玻璃比色皿/酶标板,加入 10μ L 蒸馏水,20μ L 试剂三,4μ L 试剂四,充分混匀,显色后再加蒸馏水 166μ L,混匀后 25℃静置 30 min,于 660 nm 测定吸光度,记为 A 空白管。

3. 标准管:微量玻璃比色皿/酶标板,加入 10μ L 标准液,20μ L 试剂三,4μ L 试剂四,充分混匀,显色后再加蒸馏水 166μ L,混匀后 25℃静置 30 min,于 660 nm 测定吸光度,记为 A 标准管。

4. 测定管:微量玻璃比色皿/酶标板,加入 10μ L 上清液,20μ L 试剂三,4μ L 试剂四,充分混匀,显色后再加蒸馏水 166μ L,混匀后 25℃静置 30 min,于 660 nm 测定吸光度,记为 A 测定管。

注意:空白管和标准管只需测定一次。


S-ALP 活性计算公式:

活性单位定义:37℃中每克土壤每天释放 1μ mol 酚为 1 个酶活单位。

S-AKP/ALP(μ mol/d/g 土样)=[C 标准液×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)]×V 总÷W÷T ÷1000

= 0.725×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W

C 标准液:0.5μ mol/mL;V 总:催化体系总体积,1.45mL;W:土壤样品质量,g;T:催化反应时间,24 h=1 d。

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