产品名称:琥珀酸脱氢酶(SDH)测试盒
产品规格:50管/48样,100管/96样
产品货号:YX-C-B102,YX-W-B102
免费咨询:0551-66107970
货号 |
产品名称 |
检测方法 |
规格 |
售价(元) |
YX-C-B102 |
琥珀酸脱氢酶(SDH)测试盒 |
可见分光光度法 |
50管/48样 |
260 |
YX-W-B103 |
琥珀酸脱氢酶(SDH)测试盒 |
微量法 |
100管/96样 |
500 |
琥珀酸脱氢酶(SDH)活性检测试剂盒说明书(可见分光光度法)
注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
产品内容:
试剂一: 液体 60mL×1 瓶,-20℃保存;
试剂二: 液体 0.6mL×1 瓶,-20℃保存;
试剂三: 液体 5mL×1 瓶,4℃保存;
试剂四: 粉剂×1 瓶,4℃保存; 临用前加入到试剂三中溶解待用;
试剂五: 粉剂×1 瓶,4℃保存; 临用前加入 4mL 双蒸水,用不完的试剂仍 4℃保存;
试剂六: 粉剂×1 瓶,-20℃保存; 临用前加入 3.333mL 双蒸水,用不完的试剂 4℃保存。
产品说明:
SDH (EC 1.3.5. 1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。SDH是线粒体的一种标志酶,位于线粒体内膜上的一种膜结合酶,是连接呼吸电子传递和氧化磷酸化的枢纽之一。此外,为多种原核细胞产能的呼吸链提供电子。
SDH 催化琥珀酸脱氢生成延胡索酸,脱下的氢通过吩嗪二甲酯硫酸(PMS)传递还原 2,6-二氯 酚靛酚(DCPIP),并且在 600nm 处具有特征吸收峰,通过 600nm 吸光度的变化,测定 2 .6-DPIP 的还原速度,代表 SDH 酶活性。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰 和蒸馏水。
操作步骤:
一、SDH 的提取
准确称取 0. 1g 组织或收集 500 万细胞, 加入 1mL 试剂一和 10uL 试剂二,用冰浴匀浆器或研钵 匀浆充分研磨,4 ℃ 11000 g 离心 10min ,取上清,置冰上待测。
二、测定步骤和加样表
1 、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 600nm ,蒸馏水调零。
2 、样本测定
试剂名称(μL) |
测定管 |
空白管 |
试剂三 |
60 |
60 |
试剂五 |
60 |
60 |
蒸馏水 |
800 |
800 |
37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种) 保温 10min 左右 |
||
样本 |
30 |
|
蒸馏水 |
|
30 |
试剂六 |
30 |
30 |
三、SDH 活性的计算
用 1mL 比色皿测定的计算公式如下
(1)按样本蛋白浓度计算
单位的定义: 每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟消耗 1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单 位。
SDH 活性(U/mg prot)=[(ΔA 测定-ΔA 空白) ÷ ( ε×d)×V 反总×109]÷(Cpr×V 样) ÷T =1555.556×(ΔA 测定-ΔA 空白) ÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位的定义: 每 g 组织在反应体系中每分钟消耗 1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。 SDH 活性(U/g 鲜重) =[(ΔA 测定-ΔA 空白) ÷(ε×d)×V 反总×109]÷(V 样÷V 样总×W) ÷T
=1571. 111×(ΔA 测定-ΔA 空白) ÷W
(3)按细菌或细胞密度计算
单位的定义: 每 1 万个细菌或细胞在反应体系中每分钟消耗 1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活 性单位。
SDH 活性(U/104 cell)=[(ΔA 测定-ΔA 空白) ÷(ε×d)×V 反总×109]÷(V 样÷V 样总×500) ÷T =3. 142×(ΔA 测定-ΔA 空白)
V 反总: 反应体系总体积,0.98×10-3 L;ε:2,6-二氯吲哚酚摩尔消光系数,21×103L/mol/cm;d: 比色皿光径,1cm;V 样: 加入样本体积,0.03 mL;V 样总: 加入试剂一和试剂二体积,1.01 mL; T:反应时间,1 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量,g;500:细菌或细胞总数, 500 万。
注意事项:
1 、测定过程中所有试剂和样本在冰上放置,以免变性失活。
2 、若ΔA 大于 0.5 ,需将酶液用酶提取液稀释,使ΔA 小于 0.5 ,可提高检测灵敏度。
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