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产品名称:谷氨酸(Glu)试剂盒

产品规格:50管/48样,100管/96样

产品货号:YX-C-A906,YX-W-A906

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

YX-C-A906

谷氨酸(Glu)含量测试盒

可见分光光度法

50管/48样

300

YX-W-A906

谷氨酸(Glu)含量测试盒

微量

100管/96样

580

谷氨酸(Glu)含量检测试剂盒说明书(量法
注意:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定货号:YX-W-A906
规格:100T/96S
产品内容:
试剂一:液体 60mL×2 瓶,4℃保存; 

试剂二:液体 2mL ×1 瓶,4℃保存;
试剂三:粉剂×1 瓶,-20℃保存,临用前加入 20mL 试剂一; 

试剂四:粉剂×1 支,-20℃保存,临用前加入 1.5mL 试剂二;
标准品:液体 0.5mL×1 支,4℃保存。10umol/mL 谷氨酸标准品。
产品说明:
Glu 广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,不仅是组成蛋白质的 20 种氨基酸之一,而且通过转氨基作用参与多种氨基酸合成,是生物体内主要氨基来源之一。此外,Glu 还是味精的主要有效成分,常用做食品添加剂以及香料生产。
谷氨酸脱氢酶(GDH)催化谷氨酸和 NAD 生成α-酮戊二酸、NADH 和 NH4+,引起 340nm 处吸光度的上升,通过测定 340nm 吸光度的变化,计算谷氨酸含量。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔 UV 板、研钵、冰、蒸馏水。
操作步骤:

一、谷氨酸提取:
细菌、细胞或组织样品:收集细胞或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一,超声波破碎细菌或细胞(功率 20%,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次),10000rpm,常温离心 10min,取上清待测。
称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一进行冰浴匀浆,10000rpm,常温离心 10min,取上清待测。

二、测定步骤
1、分光光度计/酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。
2、标准溶液的制备
将标准品分别稀释为 0.625、0.313、0.156、0.078、0.039μmol/mL 的标准溶液。
3、在有盖 EP 管中加入下列试剂:
(1) 标准管:在微量石英比色皿/96 孔 UV 板中加入 40μL 标准溶液、160μL 试剂三和 10μL 试剂四混匀,立即记录 340nm 处 20s 时的吸光值为 A1 和 5min20s 时的吸光值 A2,计算∆A=A2-A1。
(2) 测定管:在微量石英比色皿/96 孔 UV 板中加入 40μL 样本、160μL 试剂三和 10μL 试剂四混匀,立即记录 340nm 处 20s 时的吸光值为 A1 和 5min20s 时的吸光值 A2,计算∆A=A2-A1。

三、谷氨酸含量计算:
1、标准曲线的绘制:
以谷氨酸含量(µmol/mL)为 x 轴,标准管∆A 为 y 轴,绘制标准曲线 y=kx+b。将测定管∆A 带入方程得到 x 值。
2、氨基酸含量计算:
(1) 按照蛋白浓度计算
谷氨酸含量(µmol/mg)=x×V 样本÷(Cpr×V 样本)=x÷Cpr。
(2) 按照样品鲜重计算
谷氨酸含量(µmol/g 鲜重)=x×V 样本÷(W÷V 样总×V 样本)=x÷W。
(3) 按照细菌或细胞数量计算
谷氨酸含量(μmol/104 cell)=x×V 样本÷(500÷V 样总×V 样本)=0.002x。
V 样总:加入提取液体积,1mL;V 样本:加入的样本体积,0.04mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;
W:样本鲜重,g;500:细菌或细胞总数,500 万。

注意事项:
为提高检测灵敏度,测定管的吸光值应小于 1 且∆A 小于 0.4,若大于此值则需要将上清液用试剂一稀释至适当倍数后测定。

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