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产品名称:硝酸还原酶(NR)测试盒

产品规格:50管/24样,100管/48样

产品货号:YX-C-A800,YX-W-A800

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

YX-C-A800

硝酸还原酶(NR)测试盒

可见分光光度法

50/24

240

YX-W-A800

硝酸还原酶(NR)测试盒

微量法

100管/48样

480

硝酸还原酶(Nitrate Reductase,NR)活性测定试剂盒说明微量法

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义

NR(EC 1.7.1.3)广泛存在于植物中,是植物硝态氮转化为氨态氮的关键酶,也是诱导酶,对作物的产量和品质有影响。

测定原理

NR催化硝酸盐还原为亚硝酸盐,NO3ˉ+NADH+H→ NO2ˉ+NAD+H2O;产生的亚硝酸盐能够在酸性条件下,与对–氨基苯磺酸及α-萘胺定量生成红色偶氮化合物;生成的红色偶氮化合物在540nm有最大吸收峰,可用分光光度法测定。

需自备的仪器和用品

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制

诱导剂储备液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。

提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 10mL×1 瓶,-20℃保存。

试剂二:液体 5mL×1 瓶,-20℃保存。

试剂三:液体 5mL×1 瓶,4℃保存(如出现结晶析出,60度水浴溶解后使用);

试剂四:液体 5mL×1 瓶,4℃保存。

试剂五:标准储备液 1mL,-20℃保存。

诱导剂应用液的配制:用时将诱导剂储备液稀释10倍,即取10mL诱导剂储备液加90mL蒸馏水,充分混匀。

0.1umol/mL 的标准液的配制:用时将试剂五稀释100倍,即取0.1ml试剂五加9.9mL蒸馏水,充分混匀。

样品测定的前处理

1、取适量诱导剂于烧杯中,将新鲜标本洗净,滤纸吸干,放入诱导剂应用液中(淹没即可),

浸泡2h,取出样本,滤纸吸干后,-20℃冷冻30min,取出样本,滤纸吸干。(根据需要进行诱导处理)

2、按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

测定步骤

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至540nm,蒸馏水调零。

2、样本测定(在EP管或96孔板中加入下列试剂)

 

 

 

试剂名称(μL)

加样孔

测定管

对照管

标准管

空白管

样本

20

20

 

 

0.1μmol/mL 标准液

 

 

20

 

蒸馏水

 

100

 

120

试剂一

75

 

75

 

试剂二

25

 

25

 

混匀后,37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)反应30min

试剂三

50

50

50

50

试剂四

50

50

50

50

混匀,显色 20min,540nm 处比色

注意:标准管和空白管只需测一次,每个测定管设一个对照管。

NR 活性计算:

1)按样本鲜重计算:

单位定义:每小时每 g 鲜重样品中催化产生1μmol NO2ˉ的量为一个NR活力单位。

NR(μmol/h/g 鲜重)= (C 标准管×V1)×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷(W×V1÷V2)÷T=0.2×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W

2)按样本蛋白浓度计算:

单位定义:每小时每 mg 组织蛋白催化产生1μmol NO2ˉ的量为一个NR活力单位。

NR(μmol/h/mg prot)=(C 标准管×V1)×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷(V1×Cpr)÷T=0.2×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷Cpr

C 标准管:标准管浓度,0.1μmol/mL;V1:加入样本体积:0.02mL;V2:加入提取液体积,

1mL;T:反应时间,0.5h;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g。


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