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产品名称:线粒体分离和线粒体酶提取测试盒

产品规格:50管/48样

产品货号:YX-C-C307

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YX-C-C307

线粒体分离和线粒体酶提取测试盒

差速离心法

50/48

300

线粒体分离和线粒体酶提取试剂盒说明书分光光度法

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

线粒体是半自主性细胞器,不仅是细胞内氧化磷酸化和合成三磷酸腺苷ATP)的主要场所,为细胞的活动提供能量,而且在许多生命活动中具有重要调控作用。因此,准确和全面分离保持正常活性的线粒体已经成为许多研究的前提。

测定原理:

利用专门试剂温和匀浆组织和细胞,再采用差速离心法从匀浆中分离完整线粒体;利用专门试剂,配合超声波破碎线粒体,可以得到保持活性的线粒体酶。

自备实验用品及仪器:

超声波破碎仪、台式离心机、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

试剂一:50mL×1 -20℃保存;

试剂二:10mL×1 -20℃保存; 

试剂三:10mL×1 -20℃保存; 

试剂四:1mL×1 -20℃保存;

提取步骤:

① 准确称取约 0.1g 组织或收集约 500 万细胞,加入 1mL 试剂一和 10uL 试剂四,用冰浴匀浆器或研钵研磨。

② 4 ℃ 600 g 离心 5min。

③ 弃沉淀,将上清液移至另一离心管中,4 ℃ 11000 g 离心 10min。

④ 上清液即胞浆提取物,可用于研究线粒体蛋白向胞浆的释放。

⑤ 沉淀为完整线粒体。含有完整的内膜和外膜,并具有线粒体的生理功能。可用于线粒体的生理功能等方面的研究。

⑥ 在沉淀中加入 200uL 试剂二和 2uL 试剂四,超声波破碎冰浴,功率 20%或 200W,超声 3 秒,间隔 10 秒,重复 30 ),可用于线粒体酶活性测定。

⑦ 在沉淀中加入 200uL 试剂三和 2uL 试剂四,超声波破碎冰浴,功率 20%或 200W,超声 3 秒,间隔 10 秒,重复 30 ),可用于线粒体蛋白浓度测定。

注意事项:

1、分离线粒体和提取线粒体蛋白质的所有步骤均需在冰上或 4℃进行,所用溶液需冰浴或 4℃ 预冷。

2 、通常在分离线粒体时前后两次离心速度选取 600g  11,000g,如果希望纯度更高,但对线粒体的得率要求不高,前后两次离心速度可以采用 1000g  3500g。

3、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


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