欢迎来合肥莱尔生物科技有限公司!我们将为您提供周到的服务!销售热线:0551-66107970 15375214453
为更好查询产品,请搜索中英文简称,如丙二醛(MDA)试剂盒,搜索”丙二醛”或”MDA”
联系我们Contact us
公司名称:合肥莱尔生物科技有限公司
联系人:陈经理
固话:0551-66107970
手机:15375214453
地址:合肥市包河经济开发区花园大道17号

产品名称:过氧化氢酶(CAT)测试盒

产品规格:50管/48样,100管/96样

产品货号:YX-C-A501,YX-W-A501

产品报价:

免费咨询:0551-66107970

发邮件给我们:737388448@qq.com

分享到:

 

货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

YX-C-A501

过氧化氢酶(CAT)测试盒

紫外分光光度法

50/48

100

YX-W-A501

过氧化氢酶(CAT)测试盒

微量法

100/96

190

过氧化氢酶(CAT)测试盒说明书(微量法

产品内容

提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存; 
试剂一:液体 30mL×1 瓶,4℃保存; 
试剂二:液体 125μL×1 瓶,4℃保存。
产品说明:
CAT(EC 1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是最主要的 H2O2 清除酶,在活性氧清除系统中具有重要作用。
H2O2 在 240nm 下有特征吸收峰,CAT 能够分解 H2O2,使反应溶液 240nm 下的吸光度随反应时间而下降,根据吸光度的变化率可计算出 CAT 活性。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔(UV 板)、研钵、冰和蒸馏水
一、粗酶液提取:
1、细菌、细胞或组织样品的制备
收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率 20%,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)样品:直接检测。
2、CAT 检测工作液的配制:用时在试剂二中加入 25mL 试剂一,充分混匀,作为工作液。
3、测定前将 CAT 检测工作液在 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)水浴 10min 以上。
4、准备96孔UV 板一块(非普通酶标板,普通酶标板只能透过可见光,不能透过紫外光,检测波长小于 340nm务必使用UV 板)。
5、在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 样本和 190μL 工作液,立即混匀并计时,记录 240nm
下初始吸光值 A1 和 1min 后的吸光值 A2。计算ΔA=A1-A2。
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、血清(浆)CAT 活力的计算:
单位的定义:每毫升血清(浆)每分钟催化 1nmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。
CAT(U/mL)= [ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷V 样÷T=459×ΔA
2、组织、细菌或细胞中 CAT 活力计算:
(1) 按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化 1nmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。
CAT(U/mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V 样) ÷T=459×ΔA÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算:
单位的定义:每 g 组织每分钟催化 1nmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。
CAT(U/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样÷V 样总×W)÷T=459×ΔA÷W
(3) 按细菌或细胞数量计算:
单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟催化 1nmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。
CAT(U/104 cell)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样÷V 样总×500)÷T =0.917×ΔA
V 反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:H2O2 摩尔消光系数,4.36×104L/ mol /cm;d:比色皿光径,
1cm;V 样:加入样本体积,0.01 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,1 min;W: 样本鲜重,g;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;500:细胞或细菌总数,500 万;109:单位换算系数, 1 mol=109nmol。
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下


操作步骤:

二、测定步骤:

1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 240nm,蒸馏水调零。

三、CAT 活性计算:

1、血清(浆)CAT 活力的计算:

单位的定义:每毫升血清(浆)在反应体系中每分钟催化 1nmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。

CAT(U/mL)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷V 样÷T=764.5×ΔA

2、组织、细菌或细胞中 CAT 活力计算:

(1) 按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟催化 1nmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。

CAT(U/mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V 样) ÷T =764.5×ΔA÷Cpr

(2) 按样本鲜重计算:

单位的定义:每 g 组织在反应体系中每分钟催化 1nmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。

CAT(U/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样÷V 样总×W)÷T=764.5×ΔA÷W

(3) 按细菌或细胞数量计算:

单位的定义:每 1 万个细菌或细胞在反应体系中每分钟催化 1nmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。

CAT(U/104 cell)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样÷V 样总×500)÷T=1.529×ΔA

V 反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:H2O2 摩尔消光系数,4.36×104 L / mol/ cm;d:96 孔板光径,

0.6cm;V 样:加入样本体积,0.01 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,1 min;W: 样本鲜重,g;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;500:细胞或细菌总数,500 万;109:单位换算系数, 1 mol=109nmol。

注意事项

出现负值怎么办? 首先检查吸光值是否超过 3,如果超过3很可能是没有用UV 板,请换用 UV 板。如果未超过 3,仍然出现负值则检查反应过程是否产生气泡,气泡多说明酶活性太高,气泡影响 产生了负值,可以将样本用提取液稀释 10 倍后再检测。如果稀释样本或反应体系没有产生 气泡仍然出现较小的负值,说明该样本测不到该酶活。


 相关新闻:
全国统一客服电话:

0551-66107970

地址:合肥市包河经济开发区花园大道17号
合肥市双凤经济开发区金珠路合肥莱尔生物科技有限公司2楼1515室
联系人:陈经理
手机号码:15375214453
固定电话:0551-66107970
公司网址:www.laier-bio.com

版权所有 © 合肥莱尔生物科技有限公司  皖ICP备17006278号-2

在线客服
在线客服
用心服务 成就你我