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产品名称:DPPH自由基清除能力测试盒

产品规格:50管/24样,100管/48样

产品货号:YX-W-DPPH,YX-C-DPPH

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

YX-C-DPPH

DPPH自由基清除能力测试盒

可见分光光度法

50管/24样

260

YX-W-DPPH

DPPH自由基清除能力测试盒

微量法

100管/48样

450

DPPH自由基清除能力测试盒说明书(可见分光光度法)

注意:正式测定前务必取 2-3  个预期差异较大的样本做预测定。

产品内容:

提取液:液体 50 mL×1  瓶,4℃保存;

试剂一:无水乙醇 60 mL×1  瓶,自备,室温保存;

试剂二:粉剂×1  支(0.6 mL EP  管放于 8 mL  试剂瓶中),4℃保存。临用前加入 6.08 mL  试剂一振荡溶解,用不完的试剂可于-20℃保存一月,建议分装保存;临用前根据试验所需量按照试剂二: 试剂一(V:V)= 4:21 的比例配制成工作液,现配现用,用不完的工作液可于 4℃保存一周;

试剂三:粉剂×1 支,10 mg 维生素 C,4℃保存。临用前加入 1 mL 提取液,充分振荡溶解;配成10 mg/mL 维生素 C 溶液,用于阳性对照。

产品说明:

DPPH 自由基一种很稳定的氮中心的自由基,是样本抗氧化能力的重要指标之一,广泛应用于抗氧化类食品、保健品及药品的研究中。

DPPH 自由基有单电子,其醇溶液呈紫色,在 515 nm 处有强吸收。当有抗氧化剂存在时,DPPH 自由基被清除,其溶液颜色变浅,515 nm 的吸光度下降,在一定范围内其吸光度的变化与自由基被清除的程度成正比。本试剂盒中,通过吸光度下降的程度来反映样本清除 DPPH 自由基的能力。

自备实验用品:

可见分光光度计、恒温水浴锅、1 mL 玻璃比色皿、台式离心机、无水乙醇、研钵/粉碎机、烘干箱、30~50 目筛和蒸馏水。

操作步骤:

一、样品的制备

a.植物样本的制备:将新鲜样品置于 60℃烘箱烘干至恒重,研钵研碎(或粉碎机粉碎),过30~50  目筛。称取约 0.05 g  样本,加入 1 mL 提取液,40℃水浴浸提 30 min。室温10000 rpm 离心10 min, 取上清,置冰上待测。
b.红酒、果汁等液体样本:吸取 100 µL 样本溶液加入 900 µL 提取液,旋涡振荡混匀,室温10000 rpm 离心10 min,取上清,置冰上待测。
c.提取物或者药物:可用提取液配制成一定浓度,如 5 mg/mL。
注意:不同样本清除 DPPH 自由基的能力可能相差很大,为保证实验结果的准确性,样本要根据预实验结果进行适当调整(如清除率大于 90%,建议将提取的样本用提取液进行稀释;清除率小于 5%, 建议加大烘干样本质量或液体样本体积进行提取)。

二、测定步骤

1、分光光度计预热 30 min 以上,调节波长至 515 nm,无水乙醇调零。
2、阳性对照的准备:若需要线性关系,建议将10 mg/mL 的维生素溶液用提取液配制成 0.3、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625 mg/mL 的维生素 C 溶液待用;若需要清除率约为 100%的阳性对照,则建议将 10 mg/mL 维生素 C  溶液用提取液配制成大于 0.3 mg/mL 的维生素 C 溶液待用。

3、操作表:在 1.5 mL EP 管中分别加入下列试剂

试剂名称(µL

空白管

测定管

对照管

阳性对照管

上清液

-

25

25

-

标准溶液

-

-

-

25

提取液

25

-

-

-

试剂一

-

-

975

-

工作液

975

975

-

975

混匀后室温避光静置 30 min,于515 nm 处的吸光度。空白管、阳性对照管、对照管和测定管的吸光值分别记为 A 空白、A 阳性对照、A 对照和 A 测定。空白管只需测 1-2 次。

三、计算公式

1、阳性对照的自由基清除率计算公式:

DPPH  基清除 DVC% =[(A -A 对照)÷A ]×100% 

2、样本的自由基清除率计算公式:

DPPH 自由基清除率 D% =[[A 空白-(A 测定-A 对照)]÷A 空白]×100%

注意事项:

1、 不同样本清除 DPPH 自由基的能力可能相差很大,如果要比较不同样品的 DPPH 自由基清除能力,建议对于同一批样品加入等量的样品,红酒、组织匀浆、果汁等液体样品加入同样体积,提取物(或者药物)配制成同样浓度。在比较时,将样本根据预实验结果进行适当调整,比较同样浓度(相同稀释倍数)的清除率大小。

2 样品建议当天提取当天检测。


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