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产品名称:土壤植酸酶测试盒

产品规格:100管/48样,50管/24样

产品货号:SSM-2-G,SSM-1-G

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

SSM-2-G

土壤植酸酶测试盒

可见分光光度法

50/24

570

SSM-1-G

土壤植酸酶测试盒

微量法

100管/48

990

土壤植酸酶(phytase)试剂盒说明书分光光度法

注意:正式测定之前选择2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

植酸酶(phytase)是催化植酸及其盐类水解为肌醇与磷酸(盐)的一类酶的总称,属磷酸单酯水解酶,它能将食品和饲料中植酸及其盐转化为可供有机体利用的有效磷,降低粪便中的磷含量,减轻对环境的污染,改善营养成分的吸收和利用,因此具有极其广泛的研究和应用价值。

测定原理

植酸酶在一定温度和 pH 值条件下,水解底物植酸钠生成无机磷与肌醇衍生物,无机磷在酸性环境中与钼酸铵显色剂反应生成蓝色复合物,在 700nm 处有特征吸收峰,根据 700nm 处吸光值变化可计算得植酸酶活性。

自备实验用品及仪器

天平、低温离心机、可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿、恒温水浴锅,甲苯(不允许快递)。

试剂的组成和配制

缓冲液:液体 60mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:粉剂×1 瓶,4℃避光保存, 临用前加缓冲液30mL 配制,现用现配;用不完的试剂4℃保存一个月。

试剂二:液体 30mL×1 瓶,4℃保存。

显色剂:粉剂×6 瓶,4℃避光保存, 临用前根据用量每瓶加1mL 双蒸水溶解,再加4mL 试剂二混匀

样本处理

新鲜土样自然风干或 37 度烘箱风干,过 30~50 目筛。

测定操作表

 

对照管

测定管

样本(g

0.06

0.06

甲苯

40

40

振荡混匀,室温放置 15min

缓冲液(µL

1000

 

试剂一(µL

 

1000

混匀,37℃孵育 24h10000g4℃离心 5min,取上清

上清

500

500

显色剂(µL

500

500

混匀,静置 15min,测定 700nm 处吸光值,A=A 测定管-A 对照管。

每个测定管设一个对照管。

酶活性计算公式

标准曲线:y = 1.759x + 0.0084,R2 = 0.9977;x 为标准品浓度(μmol/mL),y 为吸光值△A。

酶活性定义: 37℃,pH5.5 的条件下,每克土样每小时从 5mmol/L 的植酸钠溶液中释放 1μmol 的无机磷为一个酶活力单位。

植酸酶活性(μmol/d /g 土样)=(△A-0.0084)÷1.759×V 反总÷W÷T

=9.84×(△A-0.0084)

V 反总:反应总体积,1.04mL;T:反应时间,1d;W:样本质量,0.06g。

注意事项

1、显色剂需要临用前根据用量配制,每一瓶是 5 个样本的用量,新配制的显色剂若有颜色则已经污染或者试剂过期,应放弃使用。

2ΔA 线性范围为 0.01-1。


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