欢迎来合肥莱尔生物科技有限公司!我们将为您提供周到的服务!销售热线:0551-66107970 15375214453
为更好查询产品,请搜索中英文简称,如丙二醛(MDA)试剂盒,搜索”丙二醛”或”MDA”
联系我们Contact us
公司名称:合肥莱尔生物科技有限公司
联系人:陈经理
固话:0551-66107970
手机:15375214453
地址:合肥市包河经济开发区花园大道17号

产品名称:可溶性淀粉合成酶(SSS)测试盒

产品规格:100管/96样,50管/48样,25管/24样

产品货号:YX-W-C404,YX-C-C404-25,YX-C-C404-50

产品报价:

免费咨询:0551-66107970

发邮件给我们:737388448@qq.com

分享到:

 

货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

YX-C-C404-25

可溶性淀粉合成酶(SSS)测试盒

紫外分光光度法

25管/24样

2000

YX-C-C404-50

可溶性淀粉合成酶(SSS)测试盒

紫外分光光度法

50管/48样

3200

YX-W-C404

可溶性淀粉合成酶(SSS)测试盒

微量法

100管/96样

6000

可溶性淀粉合成酶(Soluble starch synthase,SSS)试剂盒说明书微量法

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定


测定意义:

SSS(EC 2.4.1.21)通常以游离态存在于质体基质中,催化淀粉链延长,主要负责支链淀粉的合成。

测定原理:

SSS 催化 ADPG 与淀粉引物(葡聚糖)反应,将葡萄糖分子转移到淀粉引物上,同时生成 ADP, 在反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和 6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化 NADP+ 还原为NADPH,NADPH 生成量与前一步反应中 ADP 生成量呈正比,340nm 下测定 NADPH 增加量即可计算SSS 活性。

自备实验用品及仪器:

紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

提取液:液体 100mL×1 4℃保存; 

试剂一:40mL×1 ,4℃保存;

试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入 14mL 试剂一充分混匀备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;

试剂三:粉剂×1 4℃保存;临用前加入 8mL 试剂一充分混匀备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;

试剂四:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入 10mL 试剂一充分混匀备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;

试剂五:液体×1 支,-20℃保存;临用前加入 500μ L 蒸馏水,充分溶解备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;

试剂六:粉剂×1 支,-20℃保存;临用前加入 500μ L 蒸馏水,充分溶解备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;

粗酶液制备:

按照组织质量g):提取液体积(mL) 1:5~10 的比例建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL提取液),进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

测定步骤:

1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。

2、在 EP 管中按顺序加入下列试剂

试剂名称(μ L)

测定管

样本

75

试剂二

135

混匀,30℃保温 20 min,置沸水浴中 1 min(盖紧,防止水分散失),冰浴冷却


试剂三

75

混匀,30℃保温 30 min,置沸水浴中 1 min(盖紧,防止水分散失),冰浴冷却,10000g 25℃离心 10min,取上清液(如果一次性测定样本较多,可以将试剂四、五和六按比例配成混合液)

上清液

150

试剂四

100

试剂五

5

试剂六

5

混匀后立即 340 nm 波长下记录初始吸光度A1  2min 后的吸光度 A2,计算 Δ A=A2-A1。注意:试剂二如有沉淀,加入之前要使之充分溶解混匀。

SSS 活性计算:

a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下:

1、按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。SSS(nmol/min /mg prot)=[Δ A×V 反总÷(ε ×d)×109]÷(Cpr×V ) ÷T×稀释倍数

=528×Δ A÷Cpr

此法需要自行测定样本蛋白质浓度。

2、按照样本鲜重计算

单位的定义:每g 组织每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。

SSS 活性nmol/min /g 鲜重=[Δ A×V 反总÷(ε ×d)×109]÷(V ÷V 样总×W)÷T× 稀释倍数

=528×Δ A÷W

反总:反应体系总体积2.85×10-4 L;ε NADPH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm; d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积0.075 mL;V 样总:加入提取液体积1 mL;T: 反应时间,2 min;稀释倍数:1.73;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量。

b. 使用 96 孔板测定的计算公式如下:

1、按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。SSS(nmol/min/mg prot)=[Δ A×V 反总÷(ε ×d)×109]÷(Cpr×V ) ÷T×稀释倍数

=1056×Δ A÷Cpr

此法需要自行测定样本蛋白质浓度。

2、按照样本鲜重计算

单位的定义:每g 组织每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。

SSS 活性nmol/min/g 鲜重=[Δ A×V 反总÷(ε ×d)×109]÷(V ÷V 样总×W)÷T× 稀释倍数 =1056×Δ A÷W

V 反总:反应体系总体积,2.85×10-4 L;ε NADPH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm; d:96孔板光径,0.5cm;V样:加入样本体积,0.075 mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T: 反应时间,2 min;稀释倍数:1.73;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量。



 相关新闻:
全国统一客服电话:

0551-66107970

地址:合肥市包河经济开发区花园大道17号
合肥市双凤经济开发区金珠路合肥莱尔生物科技有限公司2楼1515室
联系人:陈经理
手机号码:15375214453
固定电话:0551-66107970
公司网址:www.laier-bio.com

版权所有 © 合肥莱尔生物科技有限公司  皖ICP备17006278号-2

在线客服
在线客服
用心服务 成就你我