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组织琥珀酸-细胞色素C还原酶活性比色法定量检测试剂盒产品说明书(中文版)


主要用途


组织琥珀酸-细胞色素C还原酶活性比色法定量检测试剂是一种旨在使用底物琥珀酸, 通过反应系统测定样品中细胞色素C还原后峰值的增高,即采用比色法测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适合于各种组织(动物、人体等)裂解悬液样品中琥珀酸-细胞色素C还原酶的特异性活性检测。可用于衰老、能量代谢、蛋白组学、病理生理学、神经病变等研究。产品不含污染性蛋白酶,严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定,反应优化,检测敏感。

技术背景

琥珀酸-细胞色素C还原酶(succinate cytochrome C reductase)是线粒体呼吸链的超级复合物(super complex),由线粒体呼吸链复合物II,通常称为琥珀酸-辅酶Q还原酶或琥珀酸脱氢酶(SQR;Succinate-Coenzyme Q Reductase;Succinate Dehydrogenase),和线粒体呼吸链复合物III,通常称为辅酶Q-细胞色素C还原酶、细胞色素还原酶或bc1复合物(QCR;ubiquinol cytochrome c oxidoreductase;cytochrome reductase;bc1 complex)等构成,调节电子由琥珀酸转移到细胞色素C上。其中SQR是线粒体电子传递链与三羧酸循环链接的载体:含有四个亚单位,包括共价结合的辅基黄素腺嘌呤二核苷酸(flavin adenine dinucleotide;FAD)和三个铁硫中心(Fe-S clusters),以及细胞色素b560亚单位;QCR是线粒体电子传递链的中心元素:含有十一个亚单位,包括细胞色素bL(b566)、bH(b562),细胞色素c1(cytochrome c1)和Rieske铁硫蛋白(Rieske iron-sulfur protein;RISP)。该复合物异常会导致嗜铬细胞瘤(paraganglioma)、肾上腺嗜铬细胞瘤(pheochromocytoma)、Leigh综合征,以及心肌疾病。基于琥珀酸底物,通过琥珀酸-细胞色素C还原酶的催化,氧化为富马酸,同时氧化型细胞色素C,转化为还原型细胞色素C,在分光光度仪下产生吸光峰值的变化(550nm 波长),由此定量测定琥珀酸-细胞色素C还原酶的特异活性。其反应系统是:

产品内容

GENMED清理液(Reagent A)  毫升

GENMED裂解液(Reagent B  毫升

GENMED缓冲液(Reagent C  毫升

GENMED反应液(Reagent D  毫升

GENMED阴性液(Reagent E    毫升

GENMED底物液(Reagent F  微升

产品说明书     1

保存方式

保存GENMED清理液(Reagent A)在4℃冰箱里,其余的保存在-20℃冰箱里,避免反复冻融;GENMED底物液(Reagent F),避免光照,有效保证6月

用户自备

1.5毫升离心管:用于反应液和样品制备的容器

15毫升锥形离心管:用于样品制备的容器

(微型)台式离心机:用于样品操作

比色皿:用于比色的容器

分光光度仪:用于比色分析

培养箱:用于孵育反应物

实验步骤

一、 样品准备

1. 手术取出动物组织,并秤重以确定组织重量 

2. (选择步骤)放进预冷的15毫升锥形离心管

3. (选择步骤)加入适量的(500毫克组织需要3毫升)GENMED清理液(Reagent A清洗1

4. 移入到一个液氮冻存管

5. 即刻放进液氮罐过夜

6. 次日从液氮罐里取出,即刻(最快速度)用研磨棒碾碎组织成粉末状(注意:切莫使组织冻融

7. 放进一个15毫升锥形离心管

8. 加入预冷xx微升GENMED裂解液(Reagent B 

9. 转移到预冷的1.5毫升离心管

10. 强力涡旋震荡30秒,充分混匀

11. 置于冰槽里孵育30分钟期间每10分钟强力涡旋震荡30(注意:如需暂时停止,放进-70℃冰箱里储存备用

12. 放进4℃微型台式离心机离心5分钟,速度为16000g(或13000RPM,例如eppendorf 5415

13. 小心移取500微升上清液到新的预冷的1.5毫升离心管

14. 移取10微升进行蛋白定量检测(注意:建议使用GENMED Bradford蛋白质浓度定量试剂盒-GMS30030.1

15. 即刻放进-70℃保存或置于冰槽里继续后续操作

一、 测定准备

1. 准备好待测样品(例如组织裂解样品等),置于冰槽里 

2. 设定好分光光度仪(温度为30℃):波长为550nm,间隔60秒,读数6次(共5分钟),并置零

3. 实验开始前,将-20℃冰箱里的试剂盒中的试剂溶液置入冰槽里融化;GENMED缓冲液(Reagent C室温预热;GENMED底物液(Reagent F注意避光。然后进行下列操作。

二、 背景对照测定

1. 移取xx微升GENMED缓冲液(Reagent C到新的比色皿

2. 加入xx微升GENMED反应液(Reagent D

3. 加入xx微升GENMED底物液(Reagent F

4. 上下倾倒数次,混匀

5. 放进30℃培养箱里静置3分钟

6. 加入xx微升GENMED阴性液(Reagent E

7. 上下倾倒数次,混匀(限定在3秒之内)

8. 即刻放入分光光度仪检测,此为背景空对照:550波长读数0分钟550波长读数1分钟或5分钟 

三、 样品活性测定

1. 移取xx微升GENMED缓冲液(Reagent C到新的比色皿

2. 加入xx微升GENMED反应液(Reagent D

3. 加入xx微升GENMED底物液(Reagent F

4. 上下倾倒数次,混匀

5. 放进30℃培养箱里静置3分钟

6. 加入100微升待测样品(注意:50微克总蛋白

7. 上下倾倒数次,混匀(限定在3秒之内)

8. 即刻放入分光光度仪检测,此为样品活性读数:550波长读数0分钟550波长读数1分钟或5分钟


四、 计算样品活性


注意事项

1. 本产品为21次操作,包括背景对照

2. 操作时,须戴手套

3. GENMED缓冲液(Reagent C含有毒性物质,避免直接用手接触

4. 系统操作过程中,背景测定只需1

5. 加入样品启动反应3秒内即刻比色测定

6. 测定值由变化;测定可以持续5分钟

7. 1分钟或5分钟测定读数0分钟测定读数,表明有酶活性

8. 比色测定后,比色皿须清洗彻底

9. 建议待测样本线粒体蛋白浓度为50微克/100微升;如果样本酶活性过低或过高,则可以增加或降低样本量;注意计算公式的调整(本公司提供GENMED Bradford蛋白质浓度定量试剂盒GMS30030.1

10. 琥珀酸-细胞色素C还原酶单位活性定义为:在30℃,pH 7.5条件下,每分钟内能够还原1微摩尔细胞色素C所需的酶量作为一个活性单位

11. 本公司提供系列线粒体及其酶类技术产品

质量标准

1. 本产品经鉴定性能稳定

2. 本产品经鉴定检测准确

使用承诺

 秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后,应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定,保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题,请立即以书面形式(实验报告)与本公司联系,并将该产品退回,经检验确系产品质量所致,本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致,本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG

订购信息

单组份订购信息

编号 名称 规格

GMS50687.2 GENMED组织琥珀酸-细胞色素C还原酶活性比色法定量检测试剂盒 20

GMS50687.2A GENMED清理液(Reagent A     毫升

GMS50687.2B GENMED裂解液(Reagent B      毫升

GMS50687.2C GENMED缓冲液(Reagent C     毫升

GMS50687.2D  GENMED反应液(Reagent D      毫升

GMS50687.2E  GENMED阴性液(Reagent E      毫升

GMS50687.2F GENMED底物液(Reagent F 毫升

GMS30030.1 GENMED Bradford蛋白质浓度定量试剂盒 100

试剂盒订购信息

产品编号

名称

规格

GMS50687.1

细胞琥珀酸-细胞色素C还原酶活性比色法定量检测试剂盒

20

GMS50687.2

组织琥珀酸-细胞色素C还原酶活性比色法定量检测试剂盒

20

GMS50687.3

纯化线粒体琥珀酸-细胞色素C还原酶活性比色法定量检测试剂盒

20

GMS50877.1

细胞NADH-细胞色素C还原酶活性比色法定量检测试剂盒

20

GMS50877.2

组织NADH-细胞色素C还原酶活性比色法定量检测试剂盒

20

GMS50877.3

纯化线粒体NADH-细胞色素C还原酶活性比色法定量检测试剂盒

20

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