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产品名称:蔗糖酶试剂盒

产品规格:50管/24样,100管/48样

产品货号:YX-C-B503,YX-C-B503

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

YX-C-B503

蔗糖酶测试盒

紫外分光光度法

50/24

280

YX-W-B503

蔗糖酶测试盒

紫外分光光度法

100管/48样

550

蔗糖酶活性检测试剂盒说明书 (微量法

注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
货号: YX-W-B503
规格: 100T/48S
产品内容:
提取液:液体50mLx1瓶,4℃保存;
试剂一:液体3mLx1瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂x1支,4℃保存,用时加入2mL蒸馏水充分溶解;用不完的试剂4℃可保存一周;
试剂三:液体3mLx1瓶,常温保存;
标准品:粉剂x1支,4℃保存,用时加入lml蒸馏水充分溶解,制备10mg/mL葡萄糖标准溶液待用;用不完的试剂4℃保存一周。
产品说明:
蔗糖酶(EC 3.2.1.26)是碳水化合物消化吸收的关键酶之一,能够水解蔗糖变成相应的单糖而被机体吸收。
本试剂盒采用3.5-二硝基水杨酸法测定蔗糖酶催化产生的还原糖的含量,由此可得出蔗糖酶水解速度。其原理是3.5-二硝基水杨酸与还原糖共热被还原成棕红色的氨基化合物,在一定范围内还原糖的量和反应液的颜色深度成正比。此法操作简便、迅速、杂质干扰较小。
试验中所需的仪器和试剂:
可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、可调式移液器、玻璃微量比色皿/96孔板、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样品测定的准备:
1. 样品的准备:
按照组织质量(g) :提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入lmL提取液),进行冰浴匀浆。8000g4C离心10min,取上清,置冰上待测。
2. 标准品的制备:
将标准品用蒸馏水稀释至3、2、1.5、1、0.5、0.25、0mg/mL(0mg/mL 为空白管)绘制标准曲线。
二、加样表和测定步骤:
试剂名称(μL) 对照管 测定管 标准品 
试剂一 10 10 10 
蒸馏水 10     
样本 20 20   
标准品     20 
试剂二   10 10 
置于25℃准确水浴10min 
试剂三 20 20 20 
混匀,100℃水浴10min左右(盖紧,防止水分失散),冷却至室温 
蒸馏水 140 140 140 
 
混匀,540nm蒸馏水调零,测定各管吸光值,ΔA=A 测定-A对照,每个测定管设一个对照管。标准曲线的建立:以标准品的浓度为x轴,540nm下的吸光度(ΔA标准=A标准管-A空白管)为y轴,绘制标准曲线。
三、蔗糖酶活力计算:
1、根据标准曲线,将△A(y)带入公式中计算出x值(mg/mL) 
2、按照蛋白浓度计算
单位定义:每mg组织蛋白每分钟催化水解lug蔗糖定义为一个酶活力单位。
蔗糖酶活力(ug/min/mg prot)=(1000×x×V1)÷(V1×Cpr)÷T=100×x÷Cpr
3、按样本鲜重计算
单位定义:每g组织每分钟催化水解1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。
蔗糖酶活力(ug/min/g鲜重)=(1000×x×V1)÷(V1×W)÷T=100×x÷W
1000: 1mg/mL=1000ug/mL: V1:加入反应体系中样本体积,0.1mL; V2:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,10min; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL; W:样本鲜重,g。

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