BCA法蛋白含量测定试剂盒说明书(微量法)

注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定，确保蛋白浓度在20-2000μg/ml内。

产品内容：

试剂A：液体 20ml×1瓶，4℃保存。

试剂B：液体 1ml×1支，4℃保存。

标准品0.5mg/mL：液体1ml×1支，-20℃保存。

产品说明：

样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。此外，可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。测定原理： 碱性条件下，蛋白质中半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸、酪氨酸以及肽键，能将Cu2+还原成Cu+；2分子的BCA与Cu+结合，生成紫色络合物，在540-595nm有吸收峰，562nm处吸收峰最强。

自备仪器和用品：

台式离心机、恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、移液器和蒸馏水。

工作液配制：临用前请根据拟用工作液体积（样本数×0.2mL），将试剂A和B按照50：1的比例混合，盖紧后充分混匀。

操作步骤：

一、样品中可溶性蛋白质提取：

1.  液体样品：澄清液体样品可以直接测定。

2.  组织样品：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液（自备，根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水），冰浴匀浆， 10000rpm，4℃离心10min，取上清，即待测液。（动物样品常常需要稀释）

3.  细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000rpm，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

二、测定操作：

1. 可见分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到562 nm，蒸馏水调零。

2. 工作液置于60℃水浴预热30 min。

混匀后置于60℃保温30min，于微量玻璃比色皿/96孔板，于562nm处测定吸光值A，分别记为A空白管、A标准管、A测定管。

注意：空白管和标准管只需要做一次。

三、计算公式：

Cpr (mg/mL)= C标准品×（A测定管－A空白管）÷（A标准管－A空白管）=0.5×（A测定管－A空白管）÷（A标准管－A空白管）
注意事项：
1.  BCA 法蛋白含量测定试剂盒，适用于测定蛋白浓度在20-2000μg/ml 样品。测定前取1-2 个样做预实验，样品蛋白含量太高的话，请稀释至相应浓度范围内，以确保测定的准确性。
2.  待测样品蛋白提取可用生理盐水、蒸馏水或PBS 提取。
3.  由于受测定温度及时间等的影响，请严格按照给定条件测定。